硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立 Preparation of DNA from Silica-Gel-Dried Leaves of Amygdalus Ledebouriana Schlecht.and Construction of Reaction System for SSR.pdfVIP

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2018-01-30 发布于上海
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硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立 Preparation of DNA from Silica-Gel-Dried Leaves of Amygdalus Ledebouriana Schlecht.and Construction of Reaction System for SSR.pdf

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硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立 Preparation of DNA from Silica-Gel-Dried Leaves of Amygdalus Ledebouriana Schlecht.and Construction of Reaction System for SSR

经济林研究2009，27(1)11-6 口 n口硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样及其SSR反应体系的建立曾斌¨，罗淑萍¨，李疆h，程运江2，廖康¨ (1．新疆农业大学a．林学园艺学院Ib．农学院，新疆乌鲁木齐830052· 2．华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，湖北武汉，430070) 摘要：对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和ssR反应体系优化进行了研究。结果表明：在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA．较好的克服了野扁桃叶片中吉有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响。通过Azso／Azso，琼脂糖凝胶电泳和PCR--SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定，2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异．提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异；确立野扁桃最佳的PCR—SsR反应体系是30～50DNA模板，0．5UTaqDNA聚合酶，2．0mmol· ng L～MgClz，0．2mmo[·L“dNTPs，0．2mmol·L一1的引物。10XTaq酶配套缓冲液(pH8．0)。反应终体积20 |‘L．引物最佳退火温度为54～57C。利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示，扩增产物在200～600bp，多态性高，且反应体系的稳定性和可重复性好。关键词：新疆野扁桃；硅胶保存l基因组DNAlSSR反应体系中图分类号：$662．9 文献标识码：A 文章编号：1003--8981(2009)01--0001--06 ofDNAfromSilica-Gel-DriedLeavesof Preparation Amygdalus for LedebourianaSchlecht．andConstructionofReaction SSR System ZENGBin“，LUO Shu—ping”。LIJiang“，CHENGYun—jian92，LIAOKang“ (1a．Horticultural University， Collage；b．AgronomyCollage，XinjiangAgricultural of Genetic Urumqi830052，XinJiang，China；2．NationalKeyLaboratoryCrop Improvement· 430070，Hubei，China) University，Wuhan HuazhongAgricultural CTABmethodwere toextract DNAfromthe