使用MabSelectXtra实现单克隆抗体IgG4高纯度和高产量中式规模捕获.PDFVIP

GE Healthcare 应用文献11-0011-58 AB 生产规模抗体纯化 使用MabSelect Xtra 实现单克隆抗体IgG 高纯度和高产量中式规模捕获 4 摘要 MabSelect XtraTM 是一种用于捕获单克隆抗体的重组Protein A 的亲和介质。它对多克隆人IgG 的动态结合能力 大约比传统的高容量ProteinA 介质要高30%，非常适合用于在高表达培养中捕获抗体。 这里描述的MabSelect Xtra 应用是使用填充在FineLINE™ Pilot 35 层析柱中的介质在ÄKTApilot™系统上进行 中式规模的单克隆抗体IgG 捕获（图1）。 4 很显然可以实现以高纯度和高产量获得IgG 产品的目标。三次操作中洗脱液中单体含量均超过99%，平均收率 4 是94%。进一步地，捕获/CIP 程序表现的十分稳定有效，适合用于进一步生产规模放大。 简介 基于ProteinA 的亲和介质已成为捕获单克隆抗体的业界标准。基于其高选择性特性，ProteinA 在这第一处理步 骤上有很高的纯度和回收率。这既可以减少对后续纯化步骤的需求，同时对可以提高整体流程的经济性。 MabSelect Xtra 是基于重组ProteinA 亲和介质MabSelect™系列的一种产品。本应用说明介绍了使用填充在 FineLINE™ Pilot 35 层析柱中的介质在ÄKTApilot™系统上进行中式规模的单克隆抗体IgG 捕获的情况。目标是 4 以高纯度和高收率获取IgG 产品。 4 图1：配有FineLINE™ Pilot 35 层析柱的ÄKTApilot™系统。用MabSelect Xtra 填充达到20cm 柱床高。 产品特性 MabSelect Xtra 与MabSelect 类似，MabSelect Xtra 是基于一种高流速琼脂糖骨架的，有较大的孔，较小的平均颗粒尺寸和较 高的配体密度。从而实现更高的结合能力：与传统的高容量ProteinA 介质相比，MabSelect Xtra 的对多克隆人 IgG 的动态结合能力要高出30%。在一个层析床内，大规模水平MabSelect Xtra 在20cm 床高上的最大推荐运 行速率为300cm/h。 MabSelect Xtra 与MabSelect 有相同的重组ProteinA 配基。设计用于促进配基的单点固定，耦合条件也是相同 的。 Ä KTApilot 系统 Ä KTApilot 层析系统是一套基于ÄKTAdesign™平台的中式和产系统。系统可以纯化从数毫克到数十克的产品， 可以轻松实现规模放大和规模缩小。系统具有卫生设计，具有高的自动化水平、精确度和可重复性，同时具有稳 定的运行模式，这让Ä KTApilot 层析系统成为规模放大、工艺优化和生产的完美选择。 材料和方法 一般信息 由Lonza Biologics, UK 提供包含IgG 单克隆抗体的NS0 细胞系上清液（参见致谢）。抗体的pI 值是6.5 到7.5。 4 在配有UNICORN™ 4.11 软件的Ä KTApilot 系统上执行所有层析步骤。图1 显示了Ä KTApilot 层析系统和 FineLINE Pilot 35 层析柱。使用一个两步方法将层析柱装填到20cm 床高。在运行操作前后的HETP 和对称因子 测试显示床的效率良好。 本研究的中一般处理是如下执行一系列8 次运行操作： 1. ‘预清洗液CIP’ （手动）* 2. 空白运行第一次† 3. 上样+CIP （捕获运行第一次） 4. 空白运行第二次 5. 上样+CIP （捕获运行第二次） 6. 空白运行第三次 7. 上样+CIP （捕获运行第三次） 8. 空白运行第四次 * 使用50mM NaOH +500mM Na2SO4CIP 溶液执行‘预上样CIP’以避免在洗脱材料中有大量ProteinA。参见 结果。 † 执行空白运行以测量可能的残留量。不采用任