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生化笔记求甘氨酸等电点将Ka1和Ka2相乘，得：Ka1Ka2=[H+]2[A-]/[A+]等电点时，[A+]=[A-],因此：[H]2= Ka1Ka2，两边取负对数，得pI = (pKa1+pKa2) /2 甘氨酸等电点= (2.34+9.60)/2=5.97 甘氨酸酸性强于乙酸甘氨酸中与羧基相邻的α-NH3+基是一个强吸引电子的基团，产生一个强场效应而稳定羧基阴离子；α-COO-基的存在影响α-NH3+的解离，甘氨酸的α-氨基的碱基明显低于乙胺。氨基酸的解离常数可用测定滴定曲线的实验方法求得。标准氢氧化钠溶液进行滴定，以加入的氢氧化钠的摩尔数对pH作图，则得滴定曲线B段，在pH9.60处有一个拐点。从甘氨酸的解离公式(2), Ka2=[A-][H+]/[A0]可知，当滴定至甘氨酸的兼性离子有一半变成阴离子，即[A0]=[A-]时，则Ka2=[H+]，两边各取负对数得pKa2=pH，这就是曲线B段拐点处的pH 9.60。如果用标准盐酸滴定，以加入的盐酸的摩尔数对pH作图，则得滴定曲线A段，在Ph2.34处有一个拐点。从解离公式(1) Ka1=[A0][H+]/[A+] ，当滴定至甘氨酸的兼性离子有一半变成阳离子，即[A0]=[A+] 时，则Ka1=[H+]，两边各取负对数得pKa1=pH，这就是曲线B段拐点处的pH 2.34 。氨基酸滴定向氨基酸例如甘氨酸溶液中加入过量的甲醛，用标准氢氧化钠滴定时，由于甲醛与氨基酸中的一NH2作用形成一NH·CH20H，一N(CH20H)2等羟甲基衍生物，而降低了氨基的碱性，滴定终点也移到pH 9附近。亦即酚酞指示剂的变色区域。总结先解离α-COOH,随后其他-COOH；再解离α-NH3+ ,随后其他-NH3+；羧基解离度大于氨基脂肪酸的-COOH基pKa值一般4-5，脂肪胺中-NH3+基pKa值一般10-11二元酸（侧链不解离的中性氨基酸）：三元酸（酸性和碱性氨基酸）：R基不解离的氨基酸都具有类似甘氨酸R侧链基团不解离的氨基酸 PI=（PK1+PK2）/2（一氨基一羧基的氨基酸）一氨基二羧基的氨基酸 PI=（PK1+PKR）/2二氨基一羧基的氨基酸 PI=（PK2+PKR）/2找到净电荷为零的兼性离子，将其两侧的pK求和除2即为等电点。对于三级以上的电离平衡，远处的pK值与兼性离子两侧的pK值相比差别较小时，不再适用。1.在pH10的谷氨酸溶液中，下列哪一种结构占优势？ EA.羧基氨基都解离B.羧基氨基都不解离C.只α-羧基解离D.只γ-羧基解离E.α-羧基和γ-羧基都解离2. 氨基酸等电点时，主要以（）离子形式存在，在pH大于pI的溶液中，大部分以（）离子形式存在，在pH小于pI的溶液中，大部分以（）离子形式存在。两性阴阳如何计算多肽的等电点和电荷情况（不同pH情况下）？测试题：某氨基酸溶液中，有四种氨基酸A、B、C、D，其等电点分别为10、4、7、5，如不考虑次要因素，1）采用阳离子交换柱并用盐浓度或pH梯度进行洗脱，将按何种顺序被洗脱？2）采用阴离子交换柱并用盐浓度或pH梯度进行洗脱，将按何种顺序被洗脱？3)你能用什么办法将它们分离开答案：1、最先流出B—D—C—A2、最先流出A—C—D—B蛋白质迁移取决于它的大小和形状变性电泳：在电泳缓冲液、凝胶中含有十二烷基磺酸钠(SDS)；上样缓冲液中含有SDS和二硫键还原剂(如巯基乙醇，二硫苏糖醇[DTT]), 电泳前样品加热煮沸一般约5分钟。该电泳英文缩写：SDS变性电泳特点（1）SDS能够与蛋白质结合，导致蛋白质变性。不同蛋白质-SDS复合物形状相似，都呈椭圆状；（2）大量SDS的负电荷使不同蛋白质本身所带电荷忽略不计，蛋白分子越大结合的SDS越多，各蛋白质-SDS复合物的电荷密度（ρ）趋于一致；（3）蛋白质-SDS复合物的电泳迁移率取决于蛋白质（亚基）分子量的大小。SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇，二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。蛋白质测序策略酸解测定氨基酸含量拆分蛋白质成多肽链(N/C)断开链内二硫键裂解多肽链成小的片段测定各肽段氨基酸顺序Edman化学降解法（Edman，1950，FITC）酶降解法：末端附件很少几个残基质谱法：电喷射电离串联质谱法确定二硫键位置确定二硫键位置一般选用胃蛋白酶水解，因为它的专一性比较低，切点多，生成的肽段包括含有二硫桥的肽段比较小，对于后面的分离鉴定比较容易。其次胃蛋白酶作用pH在酸性范