大豆再生植株抗草铵膦的筛选方法研究-大豆科学.pdfVIP

第２９卷　第６期 大 豆 科 学 Ｖｏｌ．２９　Ｎｏ．６ ２０１０年　 １２月 ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥ Ｄｅｃ．　　２０１０ 大豆再生植株抗草铵膦的筛选方法研究 １，２ １ ２ 孙　磊 ，韩俊友 ，李宏宇 （１．吉林大学 植物科学学院，吉林 长春 １３００００；２．中国农业科学院 作物科学研究所，北京 １０００８１） 摘　要：为解决农杆菌介导的大豆子叶节转化试验中草铵膦筛选所得转基因后代假阳性高的问题，采用浸种法、根 吸法、叶片涂抹法、叶片喷洒法４种筛选方法和多种筛选浓度对大豆再生植株及其后代抗性进行筛选。结果采用 １∶２００草铵膦浓度的叶片喷洒法效果最佳。叶片喷洒法筛选 ６８０２株转化植株，获得了９株抗性植株，其后代的分 子检测表明均为阳性植株。因此，采用叶片喷洒法对大豆抗草铵膦植株进行筛选的方法简便可行。 关键词：大豆；再生植株；筛选；草铵膦 中图分类号：Ｓ５６５．１　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１０００９８４１（２０１０）０６１０１９０５ ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｎＭｅｔｈｏｄｓＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＳｏｙｂｅａｎＲｅｓｉｓｔａｎｔｔｏＧｌｕｆｏｓｉ ｎａｔｅ １，２ １ ２ ＳＵＮＬｅｉ ，ＨＡＮＪｕｎｙｏｕ，ＬＩＨｏｎｇｙｕ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅ，ＪｉｌｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００００，Ｊｉｌｉｎ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ， Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｕｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｓｅｖｅｒａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎｓｏｙｂｅａｎｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔａｎｄｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆｉｔｓｐｒｏｇｅｎｙａｓｗｅｌｌａｓｔｏｒｅｓｏｌｖｅｔｈｅｐｒｏｂｌｅｍｏｆｈｉｇｈｆａｌｓｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｌａｎｔｓｉｎａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓａｆｔｅｒｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ａｆｔｅｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｔｈｅ６８０２ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｂｙｓｐｒａｙｉｎｇｔｈｅ ｌｅａｆ，９ｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ，ａｎｄｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｒｐｒｏｇｅｎｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｙｗｅｒｅａｌｌｐｏｓｉｔｉｖｅｔｒａｎｓｇｅｎ ｉｃｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｔｈａｔｓｃｒｅｅｎｉｎｇｔｈｅｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｂｙｔｈｅｌｅａｆｓｐｒａｙｉｎｇｗａｓｆｅａｓｉｂｌｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄ：Ｓｏｙｂｅａｎ；Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；Ｇｌｕｆｏｓｉｎａｔｅ －１ 　　大豆作为食用油和植物蛋白的主要来源，是我 Ａｍｍｏｎｉｕｍ（浓度为 １１３．３ｍｇ·ｍＬ ，Ｔ．Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ ［１２］ 国最重要的农作物之一 。但目前大豆育种中仍 ＰｒｏｄｓＩｎｃ）为母液，根据不同浓度按比例稀释。 面临着诸如病虫害多、品质劣、产量低等多方面挑 １．２　试验方法 战。利用生物工程手段解决上述问题是改良大豆 １．２．１　浸种法　浸种法分为２种即：浸泡未萌发的 的一种重要方法，目前大豆遗传转化多采用基因枪 种子和浸泡萌发的种子。试验中设