细胞毒理学ppt课件.pptVIP

第一节 细胞毒理学的概念及研究内容 概念：是研究外源化学物对生命细胞损伤的作用规律及机制的一门科学。 内容： 1、有害因子对机体的细胞毒作用（退行性变、坏死、死亡等）； 2、有害因子对机体的特异的细胞毒作用（致突变、癌变、畸变）； 3、细胞毒物代谢； 4、细胞毒效应作用机制； 5、进行药物筛选。 第二节 细胞毒理学方法学基础 一、无菌实验室 二、仪器与设备 培养箱 、冰箱和冷柜 、显微镜 、超净工作台 、清洗和消毒设置 、培养器皿 、离心机 、液氮贮存器 、水纯化装置 、滤过消毒装置 、一般设备 四、器皿的清洗与消毒 玻璃器皿 新的：清水-洗洁精中煮沸30min-清水-烤干-清洁液过夜-清水-蒸馏水-烤干-高压 旧的：清水-洗洁精洗刷-清水-烤干-清洁液过夜-清水-蒸馏水-烤干-高压 塑料器皿 清水24h-2%NaOH过夜-清水-5%HCL30min-蒸馏水洗-蒸馏水浸泡24h-晾干-消毒 金属器械 汽油擦除绣油-洗洁精-清水-蒸馏水-晾干-消毒 五、消毒方法 橡胶制品 新的：清水-2%NaOH煮沸20min-清水-蒸馏水浸泡24h-烘干-消毒 旧的：清水-洗洁精煮沸30min-清水-蒸馏水浸泡24h-烘干-消毒 第三节 细胞毒理学生物学基础 一、细胞分类 贴壁型 成纤维细胞、上皮细胞、游走细胞、多形性细胞 悬浮型 白血病细胞、淋巴细胞 二、细胞的形态 圆形-其他 第三节 细胞的冻存与复苏 细胞冻存 1.????? 待冻存细胞悬液的制备 (1)???? 按常规方法消化处于对数生长期的细胞培养物，制备单细胞悬液，并计算细胞总数； (2)???? 将细胞悬液以800～1000r/min离心5min，去上清夜； (3)???? 向细胞沉淀物中加入冷冻保护液，轻轻吹打混匀，使细胞密度达1×106～1×107个/ml； (4)???? 按每管1～1.5ml的量分装于冻存管内，拧紧管盖； (5)???? 再冻存管上做好标记，包括细胞代号及冻存日期。 细胞冻存 2.????? 分级冷冻 (1)???? 先将冻存管放入普通冰箱冷藏室（4～8℃），约40min； (2)???? 接着将冻存管置于普通冰箱冷冻室（- 10℃ ～-20 ℃ ），约30～60min； (3)???? 将冻存管转入低温冰箱（-30 ℃ ），放置30min左右； (4)???? 然后将冻存管转移到超低温冰箱（-70 ℃ ～-80 ℃ ），过夜； (5)???? 最后将冻存管投入液氮保存。 细胞复苏 （1）??? 将恒温水浴箱的温度调节至37℃～40℃； （2）??? 从液氮中取出冻存管，立即投入37℃～40℃温水中迅速晃动，直至冻存液完全溶解； （3）??? 将细胞冻存悬液转移到离心管内，加入约5 ml培养液，轻轻吹打混匀； （4）??? 将细胞悬液经800～1000r/min离心5min，弃上清夜； （5）??? 向细胞沉淀内加入完全培养液，轻轻吹打混匀，将细胞悬液转移到培养瓶内，补足培养液进行培养。 gy 三、玻璃器皿与器械 培养瓶、培养皿、培养板、吸管、抽滤瓶、三角瓶、移液器、手术器械、酒精灯、胶塞等。 紫外 距离2m,时间30 min。-无菌间空气、设备表面、器皿 干热 160 ℃，90-120 min。-玻璃器皿和金属器械 湿热 15磅 15 min。-布类、橡胶、金属 10磅 10 min。-液体 过滤 液体 消毒剂 乙醇、新洁尔灭、过氧乙酸、 煮沸 至少 30 min。 六、体外细胞生存的基本条件 1、营养液 2、温度 3、pH值4、渗透压5、水