医学医学课件蛋白样本制备及westernblot.ppt

蛋白样本制备与Western Blot 主要内容 一 蛋白样本制备成功蛋白分析的基础 二 蛋白样本制备的原则 二 蛋白样本制备的策略 三 案例分析-- 细胞中总蛋白的制备 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 各类表面活性剂特点 选用表面活性剂考虑的因素 去除未结合的表面活性剂 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 蛋白酶抑制剂及其鸡尾酒 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 磷酸酶抑制剂选择 磷酸酶主要包括非特异性的磷酸酶（例如：碱性磷酸酶，酸性磷酸酶），特异性的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶（例如：PP1, PP2A, PP2B） 、酪氨酸蛋白磷酸酶（例如：PTP）。 常规的抑制剂主要包括： 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 全蛋白抽提时注意事项 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点 四 蛋白样本制备产品选择指南 核蛋白样本制备 膜蛋白样本制备 膜蛋白的抽提 方法及原理 方法多 直接抽提法 分级抽提法 1:先机械法等非表面活性剂方法裂解细胞,再用表面活性剂