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高效毛细管电泳HPCE 研究生 教学 概 述 随着现代工业的发展和科学技术的进步，生物技术的发展极为迅速。以分离、纯化生物产品为目的的生物分离技术领域十分活跃。超临界苹取、双水相萃取、反微团苹取、凝胶分离、毛细管电泳、场级分离等技术相继出现。这些新颖的分离技术大大丰富了分离科学研究的内容，并解决了现代分离科学的许多难题。其中，以电场为推动力的高效毛细管电泳技术尤为引人注目。它的出现，是分析科学中继高效液相色谱之后的又一重大进展,它使分析科学得以从微升水平进入纳升水平,使单细胞分析,乃至单分子分析成为可能。高效毛细管电泳仪具有高效、快速、仪器简单、分析样品用量少等特点，目前已广泛应用于有机化合物、无机离子、中性分子、手性化合物、蛋白质和多肽、DNA和核酸片段的分析。在临床医学诊断、卫生防疫、环境监测、食品安全等领域得到广泛应用。 毛细管电泳仪的特点： 高效毛细管电泳（High Performance Capillary Electrophoresis,缩写为HPCE）是指溶质以电场为推动力，在毛细 管中按淌度差别而实现的高效、快速分离的新型电泳技术。和传统电泳技术及现代色谱相比，HPCE的突出特点是： 1、仪器简单，操作方便，容易实现自动化。简易的高效毛细管电泳仪器组成极其简单，只要有一个高压电源、一根毛细管 、一个检测器和两个缓冲溶液瓶，就能进行高效毛细管电泳实验。 高效毛细管电泳的发展与进展 毛细管电泳方法虽新，但历史悠久。以毛细管等速电泳（CITP）的发展为起点可以追溯到1960年甚至更远；多数学者以毛细管区带电泳的出现为起点（CZE）。CZE是瑞典科学家Hjerten首先提出的。1981年Jorgenson和Lukacs使用75umID的熔融石英毛细管做CZE，利用电迁移进样和荧光检测，在30kV电压下产生了4X105片/m的效率，成为毛细管电泳史上的一个里程碑。Hjerten先后提出了毛细管凝胶电泳和毛细管等电聚焦法，它们不仅可以大幅度提高效率，而且可以实现自动化操作，便于定性定量工作。1986年，Lauer报道其在蛋白质CZE中获得了106片/m的高效率。这些研究结果激发了关于CE 研究的热潮。而1988年美国Bio- Rad公司商品仪器的推出，更加使毛细管电泳技术的发展进入了应用的新时代。 理论 高效毛细管电泳装置 高效毛细管电泳装置通常由高压电源、毛细管、检测器、电解液池、进样系统、冷却系统、计算机管理与数据处理系统等7部分组成，如图所示。 1、电源 它是高效毛细管电泳的重要组成部分。要求该设备能生产较高的电压，并具有较好的稳定度。目前，试验室中常用的高压电源电压为5—30kV。理论上，电压越高，分离速度越快，分离效果越好。但由于设备绝缘村科的限制，电压不宜过高。同时，为防止高电压可能在毛纫管内和仪器内产生电晕放电，在操作者与仪器设备间必须加绝缘系统，以使操作能够安全进行。 2、 毛细管 高效毛细管电泳中使用的毛细管材料主要有聚乙烯、聚四氟乙烯和熔凝石英。其中焰轻石英毛细管传热效果好，可直接进行紫外或荧光检测，因此在试验室中员为常见。通常毛细管内径为20—200цm，壁厚200цm，长为50一100cm。理论上，分子分离不依赖于毛细管的长度，似乎短的毛细管可使峰宽减小，但从分析的实际经验来看，毛细管应保持50cm为宜。 3、检测器 由于毛细管电泳进样量很小，需要具有很高灵敏度的检测器才能将样品检测出来，因此高效毛细管电泳的检测器仍是一个研究中的课题。目前用于高效毛细管电泳的检测据有：电化学检测器、激光激发荧光检测器、质谱仪等。其中通常使用的是紫外检测器和荧光检测器。 4 、 进样系统 由于毛细管很细，管内容积很小，因此进样量很不容易控制，给实验的重复性、分辩率带采一定的影响。目前进样方法有电渗进祥、重力进样、电泳进祥等。进样量一般视检测器的灵敏度而定。 5 、 电解液池 电解液池内装载具有一定PH值的缓冲溶液，毛细管两端分别放入2个电解池内。当高压电源的铂丝电极放入电解液池并施加电压时，就形成一个闭合的电流回路。 6 、 冷却系统 电泳过程中焦耳热的产生常使区带变宽，降低分离效率。为将热量及时带出毛细管并维持管内恒定的湿度，需以恒温冷却介质加以冷却。通常可用空气直接冷却。 7 、计算机管理和数据处理系统 随着毛细管电泳技术的发展，已开始应用计算机进行自动管理、数据存贮及处理等工作，使毛细管电泳仪成为现代分析仪器。 基本操作 毛细管电泳的基本操作包括毛细管的安装、洗涤或缓冲液灌入、进样和分离等。毛细管的安装视不同仪器结构以及管中是否填充凝胶或其他固性介质而定、最一般的方法是在毛细管的负极端先开一检测窗口，然后让毛