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SYBR Green miRNA荧光定量PCR miRNA简介 microRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控。 miRNA形成过程 前体 成熟体 SYBR荧光定量检测miRNA 加尾法定量PCR(QIAGEN) 茎环法定量PCR(RIBO) 加尾法原理 茎环法原理 两种方法的比较 hsa-miR-99a表达量比较 策略 1.根据我们的经验，大部分样品中pre-miRNA含量很低甚至没有，可以采用QIAGEN加尾法进行miRNA的定量PCR检测。 2.PCR特异性都很好的时候，两种方法得到的相对表达量一致。 3.对于加尾法预实验有非特异性扩增的样品，采用RIBO茎环法进行检测。 * 特异性检测mature miRNA，可以避开pre-miRNA 检测mature miRNA的同时，也会检测到pre-miRNA PCR特异性 特异的茎环结构逆转录引物，每条miRNA单独逆转录，特异性好，但是成本更高，工作繁琐 一次逆转录得到全部miRNA、pre-miRNA和mRNA的cDNA，操作简单，但是没有选择性 逆转录 茎环法 加尾法 加尾法 茎环法 rno-miR-34b 加尾法 茎环法 hsa-miR-99a 0.91 1.05