磁珠富集法制备翘嘴红鲌微卫星分子标记.pdfVIP

维普资讯 农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotechnology 2008，16 (4)：610,-,615 ·研究论文 · 磁珠富集法制备翘嘴红鲐微卫星分子标记 水 张义凤u，孙效文 ¨，鲁翠云 ，梁利群 ，徐 伟 ，·李 勇u，刘晓锋 ．2· (1．中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，哈尔滨 150070；2．大连水产学院生命科学与技术学院，大连 116023) 摘要：根据生物素与链霉亲和素的强亲和性原理，采用生物素 。磁珠吸附微卫星富集法与传统的放射性同位素杂交法相 结合开发翘嘴红鲴 (Erythroculterilishaeformis)基因组微卫星资源。结果表明，从 l400个菌落中筛选出613个阳性克隆，占 38．31％。将288个进行测序，得到262个 (94．4_4％)含有微卫星序列的克隆，其中含有微卫星座位280个。完美型204个 ，占 72．86％；非完美型49个，占17．5％；复合型27个 ，占9．64％。设计获得243对微卫星引物，合成50对经PCR筛选，结果30对引 物可扩增出特异性条带。l2对具有多态性。 关键词：翘嘴红铂；微卫星；磁珠富集 中图分类号：S188 文献标识码：A 文章编号：1006。1304(2008)04．0610．06 MicrosatelliteEnrichmentbyMagneticBeadsin Erythroculterilishaeformis(Bleeker) ZI-IANGYi-feng ，SUNXiao-wen ，LUCui-yun，LIANGLi-qun，XUW ei，LIYong ，LIUXiao-feng “．HeilongjiangFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisheriesSciences,Harbnit50070,China； 2．CollegeofAqu-lifeScienceandTechnology,Dalina FisheriesUniversity,Dalina J16023,Chnia) ^b■嗽 Accordingtothehadgo-affinity principle ofbiotin nad streptavidin．microsatelliteDNAswereisolated from Erythroeulterilihsaeformisgenomebycombiningbiotincapturemehtodandradioactivelabelinghybridization．Inhtisexperiment, 613 (38．3l*／o)positivecolonieswereobtainedthroughl400oclonies．Sequencingof288positivecoloniesocnfirmedthat262of whichconatinedmicrosatellitesequenceclonenad280micmsatelliteloci．Fromhtesesequences，204repeatmotifs (about72．86％) wereperfect,49repeatmotifs (about17．5％)wereimperfect,27repeatmotifs (about9．64％)wereocmpound．Twohundrednad forty-threepairsofprimersweredesignedwim htesoftwarePrimer3．0．50pairsofprimerswere composednadscreened．Results showedhtat30pairswereusedsuccessfullytoamplifyspecialfragments．na d12pairsofthem wgTepolymorphism wihtinspecies．