华南农业大学LDH同工酶圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳.pptVIP

实验四  LDH同工酶圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、实验目的： 1.了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程及结构特点。 2.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理及分离乳酸脱氢酶同工酶的电泳过程。 二、实验原理 1. 聚丙烯酰胺凝胶原理及影响因素（同实验三） 2．聚丙烯酰胺凝胶电泳原理（同实验三） 3. 乳酸脱氢酶(LDH)同工酶圆盘电泳 同工酶是指生物体中结构和性质不同而能催化相同反应的一类酶。许多酶都具有同工酶（约占已知酶的40～50%），凝胶电泳可利用同工酶结构上的差异而将之分离。 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase 简称 LDH， EC.1.1.1.27）是催化丙酮酸和乳酸可逆转化的酶。 1959年 Markert 等用电泳的方法将牛心肌提纯的LDH结晶分离出5条区带，靠近阳极一端的称 LDHl ，靠近阴极一端的称为LDH5；其余3种，由阳极到阴极依次命名为LDH2 ，LDH3及LDH4。它们均具有LDH 催化活性，从而首先提出了同工酶(isoenzyme)的概念。 目前已知LDH同工酶是由亚基及M亚基按不同比例组成的四聚体，它们是H4（LDHl），H3M（LDH2），H2M2（LDH3），HM3（LDH4）及M4（LDH5）5种。心肌中以LDHl含量高，骨骼肌及肝中LDH5 含量高。 LDH同工酶底物染色显色反应如下： 三、实验材料、仪器和试剂 (一)实