玉米种子总蛋白质的提取与酸性聚丙烯凝胶电泳检测论文答辩.pptxVIP

玉米种子总蛋白质的提取与酸性聚丙烯凝胶电泳检测 指导老师：马丽 答辩：赵小雷 成员：房日裙、孙静、张延慧、 秦贵龙 、马鹏 从小麦种子中提取醇溶蛋白质 失败原因： 没有提取醇溶蛋白用的2-氯乙醇（有毒）； 加蛋白质提取液多，蛋白质浓度低； 点样时样品加的偏少。 一、实验原理 （1）聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称为PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质、TEMED催化过硫酸铵(AP)产生自由基的一种常用电泳技术。 （2）蛋白质尿素（或者SDS）形成的复合物，在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原来的电荷和形状的影响，而取决于分子量自身的大小，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，因而蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离，染色后形成不同深浅和宽窄的蛋白质条带。 二、实验材料和用具 1.材料：玉米种子 2.仪器： 离心机、垂直电泳设备、电泳仪3.试剂：TEMED、Acr、Bis、冰醋酸、硫酸亚铁、甲基绿、过硫酸铵、考马斯亮蓝R-250、无水乙醇、尿素、三氯乙酸 4. 溶液配制 （1）蛋白质提取液：18g尿素，12ml冰醋酸，加 蒸馏水溶解，再加4ml TEMED和0.05g甲基绿，加蒸馏水定容到100ml,摇匀，低温避光保存。 （2）凝胶溶液：10g丙烯酰胺，10g尿素，0.2gBis加蒸馏水溶解，加2ml冰醋酸，0.020g硫酸亚铁，加蒸馏水定容到100ml，摇匀，低温避光保