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5．酶的转换数 当酶被底物完全饱和时（Vmax），单位时间内每个酶分子（或活性中心）催化底物转变成产物的分子数称为酶的转换数（turnover number），单位是s-1。 酶的转换数可用来表示酶的催化效率。 1. 双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为 林-贝氏(Lineweaver- Burk)作图法 Vmax[S] Km+[S] V = （林－贝氏方程） + 1/V= Km Vmax 1/Vmax 1/[S] 两边同取倒数 （三）Ｋm值与Ｖmax常通过林-贝氏作图法求取 -1/Km 1/Vmax 1/[S] 1/V 2. Hanes作图法 在林－贝氏方程基础上，两边同乘[S] [S]/V=Km/Vmax + [S]/Vmax [S] [S]/V -Km Km/Vm 1/Vmax 二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系 在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化呈正比关系。 当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。 关系式为：V = k3 [E] 0 V [E] 当[S][E]时，Vmax = k3 [E] 酶浓度对反应速率的影响 三、温度对酶促反应速率的影响具有双重性 温度对酶促反应速率具有双重影响。 酶促反应速率最快时反应体系的温度称为酶促反应的最适温度(optimum temperature)。 温度对酶活性的影响 酶的最适温度不是酶的特征性常数，它与反应进行的时间有关。 酶的活性虽然随温度的下降而降低，但低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶又恢复其活性。 四、pH通过改变酶和底物分子解离状态影响酶促反应速率 酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适pH (optimum pH)。 pH对某些酶活性的影响 最适pH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。 五、抑制剂可降低酶促反应速率 酶的抑制剂(inhibitor) 酶的抑制区别于酶的变性： 抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白 变性的物质称为酶的抑制剂。 抑制作用的类型 不可逆性抑制 (irreversible inhibition) 可逆性抑制 (reversible inhibition) 竞争性抑制 (competitive inhibition) 非竞争性抑制 (non-competitive inhibition) 反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition) 根据抑制剂和酶结合的紧密程度不同，酶的抑制作用分为： 有机磷化合物 ?? 羟基酶 解毒 -- -- -- 解磷定(PAM) 重金属离子及砷化合物 ?? 巯基酶 解毒 -- -- -- 二巯基丙醇(BAL) 概念 举例 抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活。此类抑制剂不能用透析、超滤等方法予以去除。 （一）不可逆性抑制剂与酶共价结合 * 有机磷化合物 如：敌百虫、敌敌畏、乐果和马拉硫磷等 有机磷化合物 羟基酶 失活的酶 酸 * 胆碱酯酶 * 解毒剂 如：解磷定（碘化醛肟甲基吡啶，PAM） 阿托品 * 低浓度重金属离子和砷化合物 如：路易斯气 * 路易斯气与糜烂性毒剂 路易士气 巯基酶 失活的酶 酸 失活的酶 BAL 巯基酶 BAL与砷剂结合物 （二） 可逆性抑制剂与酶非共价结合 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 类型 概念 抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或消失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。 竞争性抑制剂与底物竞争结合酶的活性中心 抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶与底物形成中间产物 ，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。 反应模式 + I EI E + S E + P ES I S + + + E S I ES EI P E E 特点 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及底物浓度； I与S结构类似，竞争酶的活性中心； 动力学特点：Vmax不变，表观Km增大。 抑制剂↑ 无抑制剂 1/V 1/[S] 根据酶对底物选择的特点，酶的特异性可分为两种类型 ： 1.绝对专一性(absolute specificity) 只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物 。如脲酶仅能催化尿素水