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生 物 工 程 学 报 赵秀艳 等/黏细菌漆酶序列筛选及其重组酶酶学性质 609
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn April 25, 2017, 33(4): 609−619
DOI: 10.13345/j.cjb.160355 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved
·工业生物技术·
1,2 1,2 1,2 1,2 1,2
赵秀艳 ，常飞 ，方泽民 ，张寅良 ，肖亚中
1 230601
2 230601
, , , . . , 2017, 33(4): 609–619.
Zhao XY, Chang F, Fang ZM, et al. Bioinformatic analysis and characterization of myxobacteria laccase-like multicopper
oxidases. Chin J Biotech, 2017, 33(4): 609–619.
摘 要: 漆酶是一种应用广泛的绿色环保的多酚氧化酶。漆酶过去被认为广泛存在于植物、昆虫和真菌中，
而近年来，越来越多的细菌中也发现了漆酶的存在。黏细菌是一类重要的资源菌，但与一般细菌相比，较难分
离和纯化。文中利用生物信息学的方法，综合应用Blast 和隐马尔可夫模型方法对黏细菌蛋白质组数据库进行
搜索，并根据多铜氧化酶的保守铜离子结合位点进行进一步筛选，获得 30 个候选黏细菌漆酶序列。挑选其中
9 个，在大肠杆菌中进行重组表达。利用2,6- 甲氧基苯酚 (DMP) 等常用漆酶底物检测重组酶的催化氧化活性，
其中7 个重组蛋白具有漆酶催化活性。选择 1 个对2,6- 甲氧基苯酚 (DMP) 具有较高氧化活性的重组酶 (命名
为rSC-2) ，通过Ni-NTA 亲和层析柱纯化rSC-2 ，测试其酶学性质。纯化的rSC-2 蛋白分子量约57 kDa ，在最
适反应条件下，rSC-2 催化DMP 反应的比酶活为0.27 U/mg 。催化DMP 反应的最适温度为 60 ℃，最适pH 为
7.0 。rSC-2 在pH 7.0−8.0 有较高酶活，在 60 ℃孵育 1 h 保留 50% 以上剩余酶活。低浓度的Ca2+对酶活有一定
的促进作用，而较高浓度的Fe3+ 、Co2+ 、Ba2+对酶活的抑制作用较明显。这是首次对黏细菌漆酶序列进行系统
性的生物信息学分析，并实现纤维堆囊菌Sorangium cellulosum 序列来源的漆酶活性蛋白在大肠杆菌细胞中重
组表达。
: 生物信息学，黏细菌漆酶，重组表达，分离纯化，酶学性质
Received: September 23, 2016; Accepted: January 3, 2017
Supported by: National Natural Science Foundation of China (No..
Corresponding authors: Yinliang Zhang. Tel/Fax: +86-551 E-mail: ylzhang@
Yazhong Xiao. Tel/Fax: +86-551 E-mail: yzxiao@
(No.
610 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech April 25, 2017 Vol.33 No.4
Bioinformatic analysis and characterization of
myxobacteria laccase-like multicopper oxidases
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