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HPLC色谱峰峰型异常问题高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。...1. 色谱图中未出峰系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。2. 一个峰或几个峰是负峰流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。3. 所有峰均为负峰信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。4. 所有峰均为宽峰系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。5. 所出峰比预想的小样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。6. 出现双峰或肩峰进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。7. 前伸峰进样量或样品浓度高，溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。柱温低：升高柱温;样品溶剂选择不恰当：使用流动相作为样品溶剂;样品过载：降低样品含量;色谱柱损坏：更换柱子。8. 拖尾峰柱超载，降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰，对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用，加入三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效，更换烧结不锈钢;加在线过滤器，对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大，将连接点降至最低;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降，更换柱子;采用保护柱，对柱子进行再生。9. 出现平头峰检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。10. 出现鬼峰进样阀残余峰，可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物，改进样品的预处理;流动相污染，更换新流动相，尽可能现配现用，隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡，打开Purge阀，加大流速排除。11. 峰分叉保护柱或分析柱污染：取下保护柱再进行分析,如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。12. 峰变形样品过载，减少样品载量。13. 早出的峰变形样品溶剂选择不恰当 减少进样体积 运用低极性样品溶剂14. 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰柱外效应 调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) 使用小体积的流通池15. 酸性或碱性化合物的峰拖尾缓冲不合适使用浓度50～100 mM的缓冲液使用Pka等于流动相pH值的缓冲液16. 额外的峰(1)样品中有其他组分：正常现象;(2)前一次进样的洗脱峰：增加运行时间或梯度斜率提高流速;(3)空位或鬼峰：检查流动相是否纯净 使用流动相作为样品溶剂 减少进样体积a