HPLC色谱峰峰型异常问题.doc

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HPLC色谱峰峰型异常问题

HPLC色谱峰峰型异常问题高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。... 1. 色谱图中未出峰 系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。 2. 一个峰或几个峰是负峰 流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。 3. 所有峰均为负峰 信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。 4. 所有峰均为宽峰 系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。 5. 所出峰比预想的小 样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。 6. 出现双峰或肩峰 进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。 7. 前伸峰 进样量或样品浓度高,溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。 柱温低:升高柱温;样品溶剂选择不恰当:使用流动相作为样品溶剂;样品过载:降低样品含量;色谱柱损坏:更换柱子。 8. 拖尾峰 柱超载,降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点降至最低;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,更换柱子;采用保护柱,对柱子进行再生。 9. 出现平头峰 检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。 10. 出现鬼峰 进样阀残余峰,可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除。 11. 峰分叉 保护柱或分析柱污染:取下保护柱再进行分析,如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。 12. 峰变形 样品过载,减少样品载量。 13. 早出的峰变形 样品溶剂选择不恰当 减少进样体积 运用低极性样品溶剂 14. 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 柱外效应 调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) 使用小体积的流通池 15. 酸性或碱性化合物的峰拖尾 缓冲不合适使用浓度50~100 mM的缓冲液使用Pka等于流动相pH值的缓冲液 16. 额外的峰 (1)样品中有其他组分:正常现象; (2)前一次进样的洗脱峰:增加运行时间或梯度斜率提高流速; (3)空位或鬼峰:检查流动相是否纯净 使用流动相作为样品溶剂 减少进样体积a

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