光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性影响论文答辩.ppt

设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响 姓名：阳启顺 班级：10生科2班 指导教师：杨红玉 教授 设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响 姓名：阳启顺 班级：10生科2班 指导教师：杨红玉 教授 提纲： 一. 课题的任务 二. 课题的目的和意义 三. 原始资料和参考文献 四. 基本内容及主要方法 五. 实验成果、结论 一. 课题的任务 1.1 制定实验方案 1.1.1查阅相关文献资料 1.1.2配制所需溶液 1.1.3准备所需的实验材料和仪器设备 1.2 实施实验方案 1.3 分析实验结果，得出结论 二. 课题的目的和意义 　　　 近年来，灰霉菌致病机制的研究越来越广泛。本课题目的在于通过将灰霉菌大分子毒素渗入到拟南芥叶片中，设置光照、黑暗为对照实验，统计观察拟南芥叶片的病情，进一步探索光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响，进而为研究灰霉菌的致病机制作出铺垫。 三. 原始资料和参考文献 杨红玉，李 湘，张一凡，李 然《灰霉菌培养及其对拟南芥的侵染》05 夏绍嫘，杨红玉，吴 嘉《灰霉菌与其分泌毒素对拟南芥致病性比较》11 夏绍嫘《灰霉菌致病大分子的提取、分离及其特性鉴定》云师大11 胡海林《拟南芥与灰葡萄孢菌互作中ESB1基因作用初探》农大13 张美丽《拟南芥经灰霉菌胞外大分子毒素处理后SOD的变化》09生科 四. 基本内容及主要方法 4.1 配制马铃薯蔗糖培养基、马铃薯蔗糖培养液、拟南芥种 子MS培养基。 4.2 拟南芥的栽培、管理：种子消毒→铺种→恒温管理。 4.3 灰霉菌的培养：接种→振荡恒温（25-28℃）培养。 四. 基本内容及主要方法 4.4 灰霉菌大分子毒素的提取：菌体培养液→过滤去菌丝→ 离心去上清液→抽滤去除残留菌丝、孢子→透析→冷冻 干燥→经0.45μm膜过滤→离心抽滤→粗提液（样品）。 四. 基本内容及主要方法 4.5 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度的测定 4.5.1紫外分光光度法（如下表） 四. 基本内容及主要方法 4.5.1紫外分光光度法（标准曲线） 四. 基本内容及主要方法 4.5.2 Bradford检测法（见下表） 四. 基本内容及主要方法 4.5.2 Bradford检测法（标准曲线） 四. 基本内容及主要方法 4.6 灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察 4.6.1 调整灰霉菌大分子毒素蛋白浓度 大分子毒素蛋白浓度测定完成后，用灭菌蒸馏水将浓度调整到 400μg/ml、200μg/ml。 四. 基本内容及主要方法 4.6 灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察 4.6.2 设置对照实验（如下表） 四. 基本内容及主要方法 4.6.3 将灰霉菌大分子毒素渗入拟南芥叶片中 　　　拟南芥叶片先经 75%酒精进行表面消毒，用1ml注射器针头在叶 片上刺一小孔，用一手按住叶片背面，用1ml去针头的注射器沿针刺小孔 将毒素渗入，每片叶片渗入10μl。 4.6.4 观察、统计拟南芥发病情况 五. 实验成果、结论 5.1 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果 用紫外分光光度法测定大分子毒素的蛋白浓度，蛋白质标准曲线如 图3.1所示。实验测得待测样品在280nm下三次吸光度均值为0.490，代 入标准曲线图关系式：y=0.0006x+0.0069，解得x=809μg/ml。因此，样 品浓度为809μg/ml。 五. 实验成果、结论 5.1 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果 用Bradford检测法测得样品吸光度值2.308，将该值代入标准曲线 图3.2中关系式：y=0.0029x+0.0081，解得x=793μg/ml，也就是说样品 浓度为：793μg/ml。由此可见，用两种方法测定灰霉菌大分子毒素蛋白 浓度所得的数据并不一致，但是相差不大。实验用浓度可取平均值 800μg/ml。 五. 实验成果、结论 5.2 蛋白质浓度测定方法比较、讨论 五. 实验成果、结论 5.2 蛋白质浓度测定方法比较、讨论 　 本实验提取的大分子毒素量（样品）很少，在测定其浓度时，尽 量避免浪费。由以上方法可知，紫外分光光度法与考马氏亮蓝G-250需 要的样品量较少，适用于本实验，故而选择这两种方法。另外，还需考 虑所用方法的灵敏度范围。 五. 实验成果、结论 5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的