2010版药典微生物限度检查增修订内容.ppt

2010版药典微生物限度检查增修订内容 1.培养基的适用性检查1.1细菌、霉菌及酵母菌计数 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。 1.1.1 菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代，从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代）。试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 大肠埃希菌（Escherichia coli）〔CMCC（B） 44 102〕 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）〔CMCC（B） 26 003〕 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B） 63 501〕 白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F） 98 001〕 黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F） 98 003〕 1.1.2菌液制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，培养 18～24 小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，培养 24～48 小时。上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数为 50～100cfu 的菌悬液。 接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养 5～7 天，加入 3～5ml 含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数 50～100cfu 的孢子悬液。 菌悬液在室温下放置应在 2 小时内使用，若保存在 2～8℃可在 24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在 2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 1.1.3培养基适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 50～100cfu， 分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿， 混匀，凝固，置 30～35℃培养 48 小时，计数；白色念珠菌、黑曲霉菌各 50～100cfu， 分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备 2 个平皿，混匀，凝固，置 23～28℃培养 72 小时，计数；取白色念珠菌 50～100cfu，注入无菌平皿中，立即倾注酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基，平行制备 2 个平皿， 混匀，凝固，置 23～28℃培养 72 小时，计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 1.1.4结果判定 被检培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值大于 70%，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性检查符合规定。 2.控制菌检查 控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基均应检查。 检查项目包括：培养基的促生长能力、指示能力和抑制特性能力。 菌种 对试验菌种的要求同细菌、霉菌及酵母计数方法的验证。 2.1增菌培养基促生长能力检查：分别接种不大于 100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。 2.2固体培养基促生长能力检查：取试验菌各 0.1ml（含菌数 50～100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。被检培养基与对照培养基生长的菌落大小形态特征应一致。 2.3固体培养基指示能力检查：取试验菌各 0.1ml（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及时间下培养。被检培养基中试验菌生长的菌落形态、大小、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。 2.4液体培养基指示能力检查：分别接种不大于 100cfu 的试验菌于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。 2.5培养基抑制能力检查：接种不少于 100cfu 的试验菌于被检培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及最长时间下培养，试验菌应不得生长。 控制菌检查 培养基 特性 实验菌株 大肠埃希菌