蛋白质的鉴定、分析以及分子量和浓度的测定protein identification 1-培训讲座课件PPT.pdfVIP

第三章 蛋白质的鉴定和分析、 分子量及浓度测定 李 卫 芳 中国科学技术大学生命科学学院 3607932 蛋白质的鉴定和分析 解释一个未知基因功能的蛋白质 4个关键的平台技术 1. 样品的制备和处理 （李旭已介绍） 2. 蛋白质的鉴定和浓度测定 (定性、定量） 3. 细胞作图 •生物化学相关网站 •National center for Biotechnology information •ExPASy Proteomics Server •KEGG 从PATHWAY数据库中可以浏览到有关信号通路的信 息 •DIP （Database of Interacting Proteins ）蛋白质之间的相 互作用 • /pdb/home/home.do 动态范围因素 6 6 一个生物样品中的蛋白质丰度的动态范围可达10 (10 -10 copy)/cell e.g. one protein, 1×105 copy/cell ， 106 cell ， Mr = 25 kD Pr含量＝ 4 ng 一、掌握常用蛋白纯度鉴定的方法 二、了解蛋白纯度鉴定的相对性 三、掌握常用蛋白纯度鉴定方法、原理及应用－－ 电 泳 四、掌握蛋白电泳实验的全过程及注意事项 五、了解几种常见的电泳染色方法 六、了解2D的原理、应用及操作 七、了解转膜电泳的原理、应用及操作 八、了解蛋白分子量测定的常用方法及原理 九、掌握蛋白浓度测定的常用方法、原理及应用 一、掌握常用蛋白纯度鉴定的方法 电泳 色谱 (HPLC) 质谱（肽质量指纹法PMF/质谱分析法） N-端序列测定 沉降 等等 ND SDS •电泳 IEF CE 纯的蛋白质在一系列不同pH条件下进行电泳时，都 将以单一速度移动 one band •色谱 (HPLC) Gel filtration ion exchange Reverse phase 纯的蛋白质在HPLC 的洗脱图谱上呈现单一的对称峰 Gel filtration Superdex 75 (Amersham Biosciences) gel filtration profiles of ZO1PDZ2 (upper panel) and ZO2PDZ2 (lower panel) IEC Reverse Phase Chromatography (RPC) •沉 降 纯的蛋白质在离心场中，应以单一沉降速度移动 沉降系数主要由分子大小和形状决定。 Density gradient centrifugation •质谱 Mass Spectrometry Sample Ion Mass Detector Source Analyzer Sample becomes Sample components Mass of each negatively charged separated by mass