海洋分子生物学实验教学大纲2006-12-29.docVIP

海洋分子生物学实验教学大纲 一、制定本大纲的依据 依据《海洋分子生物学教学大纲》制定本实验大纲。分子生物学技术已经渗透到生物学的各个分支学科及农林海洋的各个分支领域，并正在迅速改变着它们的面貌。对分子生物学实验技术的掌握已经成为这些学科在新的高度和水平揭示生命奥秘的共同需求。本实验课教学主要从基因的分离、纯化、鉴定等方面入手，帮助学生掌握分子生物学基本的实验方法和技能，在此基础上对海洋分子生物学方法的应用和意义有一个整体的把握，在可能的情况下同时提供多种实验材料让学生自行设计和准备实验，培养其独立科研能力。为此，制定本实验大纲，使学生全面掌握分子生物学实验基本原理和技术，为培养基础扎实、适应性强的海洋分子生物学人才奠定基础。 二、本实验课程的具体安排 实验项目的设置及学时分配 序号 实验项目名称 内容简介 实验学时 实验要求 实验类型 实验类别 每组人数 1 海藻基因组DNA的提取 了解基因组DNA是代表一个细胞或生物体全套遗传信息的所有DNA 序列 PCR扩增反应 掌握PCR的基本原理、反应体系的组成及基本反应步骤 质粒的提取 理解质粒载体有独立复制能力，能够利用宿主酶系转录和翻译，有多种限制性内切酶单一切口及筛选标记 限制性内切酶反应 理解限制性内切酶识别DNA的特异序列并切割；可产生粘性或钝性未端；带有相同类型的粘性末端或钝性末端的DNA都可以再相互连接 DNA 掌握凝胶电泳可分离不同分子质量的DNA, 也可以分离相对分子质量相同,但构型不同的DNA分子 是海洋本科生的专业必修，是培养基础性、应用性人才的最重要的、不可或缺的一环，担负着学生动手能力、创新能力培养的重任。综合性实验，让学生系统地、扎实地掌握海的基理论、基本知识、基本技能与方法，训练学生对基本的能力，培养学生综合运用知识的能力和创新能力，熟练使用专业常用的仪器设备，为毕业论文和科学研究打下良好基础。学生了解海基本方法和技能，使用常用的仪器设备，熟悉的基本方法和特点；能运用所学的专业知识分析实验过程中出现的问题。实验前准备工作，实验操作的规范性和准确性，解决争议问题，边做实验边动脑筋的习惯。基因组DNA的提取要求 通过本实验学习海藻基因组DNA的提取的基本原理和实验技术 内容 基因组DNA的介绍 仪器设备和 鱼腥藻7120、液氮、、酚、氯仿、乙醇、TE缓冲液、Eppendorf管等 PCR扩增要求 通过本实验学习PCR反应的基本原理和实验技术 内容 PCR 原理和多种PCR方法及其应用介绍PCR技术扩增已知的基因片段PCR产物 和 PCR扩增仪、琼脂糖凝胶电泳系统、DNA模板、引物1、引物2、dNTP、Taq酶、Eppendorf管等 质粒DNA的提取要求通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒的方法和技术 内容 仪器设备和 恒温培养箱、恒温摇床、台式离心机、高压灭菌锅、Enpendorf管、含pUC19、pGEX质粒及含目的基因质粒的大肠杆菌、碱裂解溶液酚、氯仿、乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶限制性内切酶反应限制性内切酶要求通过本实验学习和掌握限制性内切酶质粒DNA的方法和技术 内容限制性内切酶DNA的酶切 仪器设备和 电泳仪锥形瓶一次性塑料手套凝胶自动成像仪DNA的pUCl9质粒、琼脂糖Enpendorf管、EcoRI、BamHI、XhoI等限制性内切酶琼脂糖凝胶电泳检测DNA 基本要求 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测海藻DNA的方法和技术 内容 电泳基本知识介绍，琼脂糖凝胶的制备，电泳检测质粒DNA及其部分酶切和不完全酶切的产物 仪器设备和TAE电泳缓冲液、EB、加样缓冲液、琼脂糖等 4