生物化学课件 Section E（DNA复制）.ppt

 1）模板(template)：解开成单链的DNA母链 2）底物(substrate)或称原料：dATP、dGTP、dCTP、dTTP 3）引物(primer)：复制需要一小段RNA作引物 4）能源：需ATP供能，原料dNTP本身也是高能化合物 5）酶和蛋白质因子：DNA聚合酶(polymerase)等 拓扑异构酶Ⅰ（topoisomerasⅠ） 转轴酶 拓扑异构酶Ⅱ 旋转酶 （gyrase） 切断DNA双螺旋中的一股，张力下降后封闭。 切断DNA双链，使另一双链经过此缺口，再封闭。 DNA连接酶 催化二段DNA链之间3’,5’ 磷酸二酯键的形成 缺口填补: 连接双股DNA分子中一链的缺口 双链DNA分子中双链的缺口 不能连接二分子单链DNA 需要 模板 DNA聚合酶Ⅲ全酶（DNA Polymerase Ⅲ holoenzyme） 10种不同亚基组成 θαε τ γ2 δ δ’ χψ DNA聚合酶Ⅲ※ β(4个) DNA聚合酶Ⅲ全酶 第三节 DNA复制过程(起始、延长、终止） 确定复制的起始点 解开双链DNA,提供单链DNA模板 形成复制叉 DNA合成的起始和延长 形成带有新合成的DNA片段的复制泡 复制的终止 原核生物 双向复制 （θ型复制） 特定起始点：oriC 真核生物 多个复制单位（复制泡） （复制起始点+复制叉） 多个起始点 起始:形成复制叉replication fork需解决两个问题 DNA解开成单链，提供模板 合成RNA引物，提供 3? -OH末端 延长: DNA-pol Ⅲ ( DDDP-Ⅲ )的5? → 3?的聚合活性使核苷酸之间生成3?，5?磷酸二酯键 模板 以DNA单链为模板 底物 dNTP（dATP、dGTP、dCTP、dTTP） 引物 以小片段RNA为引物，在 RNA引物的 3? -OH末端上开始逐个添加dNTP 按碱基配对原则 （A = T G ≡ C） 按5? → 3? 方向 复制的终止 去除RNA引物 补充空缺 连接 DNA聚合酶Ⅰ的小片段 5’ 3’外切酶 DNA聚合酶Ⅰ的大片段 3’ 5’外切酶 5’ 3’聚合酶 DNA连接酶 一、逆转录病毒与逆转录酶 逆转录（reverse transcription）： 以RNA为模板，在逆转录酶的催化下，合成双链DNA的反应。 逆转录酶：又称依赖RNA的DNA聚合酶 （RNA-dependent DNA polymerase） 以RNA为模板的dNTP聚合活性 以DNA为模板的dNTP聚合活性 RNase 活性 逆转录研究的意义 传统中心法则的挑战 拓宽了病毒致癌理论 重要的工具酶 ——获取目的基因的重要方法之一 突变的分子基础　 1. 根据突变所引起的表型改变分为： 形态突变型； 生化突变型； 致死突变型； 条件致死突变型。 2. 根据基因结构的改变方式： 碱基替换突变； 碱基倒位； 移码(插入与缺失)突变。 3. 从DNA碱基序列改变的多少： 单点突变(替换)； 多点突变(移码)。 4. 从突变所引起的遗传信息意义的改变： 同义突变； 错义突变； 无义突变。 上述各类DNA分子结构改变都有其内外两方面的原因，据此，通常把突变区分为自发突变和诱发突变。 自发突变：由于细胞内部形成了能起诱变作用的代谢产物，改变了DNA分子的结构。 诱发突变：是由于诱变因素辐射射线和化学药剂诱发生物突变造成的。 光复活(photoreactivation) 1. 概念：在可见光存在的条件下，在光复活酶作用下将UV引起嘧啶二聚体分解为单体的过程。 2. 条件：可见光(300~600nm)、PR酶、嘧啶二聚体 3. 作用过程： ①光复活酶与T=T结合形成复合物; ②复合物吸收可见光切断T=T之间的C-C共价键,使二聚体变成单体; ③光复酶从DNA链解离. *光复活是原核生物中的一种主要修复形式。 切除修复 1.概念:在损伤的任何一端打开磷酸二酯键，然后外切掉一段寡核苷酸；留下的缺口由修复性合成来填补，再由连接酶将其连接起来。 2.特点：消除由UV引起的损伤，也能消除由电离辐射和化学诱变剂引起的其他损伤。切除的片段可由几十到上万bp。 3.过程： ①内切酶在DNA损伤的一端,切开形成一个切口; ②外切酶将损伤部位切除; ③聚合酶的作用将切口补齐,留下一个切口; ④连接酶的作用将DNA连接形成完整的DNA链。 （二）切除修复 参与的酶有 核酸内切酶，polⅠ　,DNA连