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PLGA-PEG纳米粒包裹白花丹醌靶向治疗前列腺癌的研究硕士研究生：李伟锋导师：鞠文教授中文摘要目的：制备包裹白花丹醌靶向PLGA-PEG-COOH纳米粒，研究其在人类前列腺癌细胞LNCaP细胞株内的分布及其体外细胞毒性作用，提高药物靶向治疗效果,降低药物对正常细胞组织的毒副作用。方法：通过纳米沉降合成无菌PLGA-PEG载药纳米粒，利用EDC/NHS催化剂连接载药纳米粒与抗PSMA抗体，制备靶向载药纳米粒。无菌PLGA-PEG纳米粒包裹香豆素-6制备荧光纳米粒，与LNCaP细胞共同孵育，用PI作为细胞核染剂，通过共聚焦荧光显微镜观察靶向纳米粒及非靶向纳米粒在细胞内的分布，并通过流式仪分析靶向与非靶向纳米粒的摄取率。将纳米粒按白花丹醌药物、靶向载药纳米粒、载药纳米粒、靶向空白纳米粒及空白纳米粒分为五组，每组药物按照相同的白花丹醌剂量根据既定的药物浓度1.25uM、2.5uM、5uM、10uM和20uM分别与LNCaP细胞共同孵育24小时、48小时和72小时。通过MTT分析药物毒性反应，并计算各组药物的IC50值。结果：制备PLGA-PEG-COOH纳米粒的原材料经紫外线消毒后合成的纳米粒，经核磁氢谱分析，纳米粒含有聚合物PLGA-COOH和NH2-PEG-COOH特征峰，未见其他杂质峰。纳米粒粒径仪分析纳米粒连接抗体前后其粒径、分散性分别为166.4± 2.1nm，0.213±0.007(n=10)和200.3±2.3nm，0.134±0.013(n=10),无明显差异（P0.05）。共聚焦荧光显微镜显示PI红染的细胞核周围，靶向/非靶向纳米粒均匀分布细胞质内，且靶向纳米粒荧光亮度高于非靶向纳米粒。流式细胞仪分析结果显示相同时间内靶向纳米粒的摄取率高于非靶向纳米粒，随着时间的推移，两者的摄取率逐渐增加，在孵育的最初的2小时内，细胞的摄取量增加明显，2 小时后，摄取量趋于稳定。MTT结果显示非载药纳米粒在给定剂量下对LNCaP细胞株无细胞毒性反应，相同药物剂量靶向载药纳米粒的细胞毒性强于非靶向载药1纳米粒,两者均低于纯药的细胞毒性。靶向载药纳米粒的IC50为4.78±0.83uM明显高于非靶向载药纳米粒10.33±2.48uM，(n=10,P0.05)。结论：靶向载药纳米粒具有明显的杀伤LNCaP细胞株作用，对于靶向治疗前列腺癌具有良好的应用潜能。关键词：PLGA-PEG-COOH纳米粒；白花丹醌；LNCaP细胞；靶向治疗2TheresearchofplumbarginloadedPLGA-PEGnanoparticles fortargetingtherapyofprostatecancerAbstractObject:ToprepareplumbarginloadedPLGA-PEGnanoparticlesandtostudythedistributionofnanoparticlesinsideLNCaPcells,thecytotoxityinvitroforimproving thedrugtargetingtherapeuticeffectanddeceasingthedrugsideeffectsonnomalcellsandtissues.Methods:ThesterilenanoparticlessynthesizedbynanoprecipitationinsterilecircumcuistanceconnectwithantibodyofPSMAthroughcatclystEDC/NHSto preparetargetingnanoparticles.Forstudyingthedistributionoftargetingang non-targetingnanoparticlesinsidetheLNCaPcells,thenanoparticlesencapsulating coumarin-6areincubatedwithLNCaPcellsandthecellnucleusaredyedbyPI,then observedbyconfocalfluorscencemicroscope.Thenanoparticlesuptakearetestedby flowcytometry(FCM).Thenanoparticlesaredevidedintofivegroups,namely plumbagin,blanknanoparticles,targetingnanoparticles,drug-loading nanoparticles,targetingdrug-loadingnanoparticles.eachgroupdevidedintofivesubunitsaccording