蛋白质z水平及其基因多态性与急性缺血性脑卒中的相关性分析word论文.docxVIP

蛋白质Z水平及其基因多态性与急性缺血性脑卒中的相关性研究硕士生：徐芝龙专业：血液内科导师：潘学谊（教授）中文摘要研究背景：随着我国逐渐跨入老龄化社会，老年人口越来越多，急性血栓性脑血管疾病的发病率越来越高，已成为我国老年人最常见的死亡原因之一。血栓形成的病理过程是复杂的，其作用机制包括血管因素、凝血、抗凝以及纤溶功能异常等。探讨血栓形成的发病病理过程，对诊断和治疗临床血栓性疾病具有重要的指导意义。蛋白质Z（protein Z，PZ）是维生素K依赖的血浆蛋白，为蛋白质Z依赖性蛋白酶抑制剂（Protein Z-dependent protease inhibitor,ZPI）抑制凝血因子Xa的辅因子，PZ能提高ZPI 抑制凝血因子Xa的活性，在出血及血栓性疾病中发挥双向调节作用。最近国外有少量的文献报道，血浆PZ水平及其基因多态性与急性缺血性脑卒中的患病风险相关，但研究结果不一。本研究首次在中国汉族人群中分析血浆PZ水平及其基因多态性与急性缺血性脑卒中(Acuteischemicstroke,AIS）的相关性，并探讨其可能的作用机制，为临床上的预测、诊断与治疗提供一定理论依据。目的：1.探讨血浆PZ水平在急性缺血性脑卒中发生的意义。2.探讨PZ基因多态性与急性缺血性脑卒中的相关性。3.揭示血浆PZ水平与其启动子A-13G和内含子F中G79A两种基因多态之间的相关性。4.填补中国人群在PZ水平及基因多态性与急性缺血性脑卒中相关性研究中的空白。1方法：第一部分测定急性缺血性脑卒中患者PZ血浆变化完成收集AIS患者、健康对照组的血液样品后，用ELISA法检测各组血浆PZ水平。实验分2组：急性缺血性脑卒中患者急性期组（初发组和再发组）、正常对照组。严格按照PZELISA试剂盒说明书完成实验过程。完成统计分析，探讨AIS患者血浆PZ 水平变化。第二部分测定急性缺血性脑卒中患者PZ基因多态性实验分2组：AIS组、正常对照组。每个血液样品收集完成后，用盐析法提取外周血基因组DNA，对基因组DNA进行聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,PCR）扩增，并利用限制性内切酶片段长度多态性方法结合基因测序技术，检测PZ启动子A-13G及其内含子F中G79A两种基因多态性。第三部分分析PZ血浆水平与其基因多态性的相关性PZ血浆水平比较采用t检验统计；多态性位点基因型和等位基因频率比较采用卡方检验；计算各组中等位基因和基因型分布频率采用Hardy-Weinberg平衡检验；PZ 血浆水平与其基因多态性的相关性采用Spearman秩相关系数表示；PZ基因型和等位基因与AIS风险预测采用比值比(OR) 及其95%的可信区间(CI) 来表示。结果：第一部分AIS患者血浆PZ水平变化1.AIS组的血浆PZ水平显著低于对照组（P0.01）。2.AIS再发组PZ水平明显低于初发组(P0.01)。第二部分PZ启动子A-13G及内含子G79A基因多态性分布1.AIS组PZ基因内含子F中G79A位点G等位基因频率显著高于对照组（P0.05）。2.AIS组PZ基因内含子F中G79A位点A等位基因频率明显低于对照组(P0.05)。3.AIS组G79A位点与对照组的基因型AA型（29.0%vs34.0%）、AG型（50.1%vs54.1%）、GG型20.9%vs11.9%），差异有统计学意义（P=0.05）。4.AIS组A-13G位点等位基因频率及基因型（AG型、GG型、AA型）与对照组没有明显差异（P＞0.05）。5.对照组PZ启动子A-13G的G等位基因频率显著高于欧洲白种人群2（60.7%vs13.1%），PZ内含子F中G79A的A等位基因频率显著高于欧洲白种人群（61.1%vs40.7%）。第三部分PZ血浆水平与其基因多态性的相关性1.AIS组PZ内含子F中G79A中AA基因型的PZ水平明显低于对照组（P0.05）。2.AIS组PZ内含子F中G79A中GG基因型的PZ水平明显高于对照组（P0.05）。3.AIS组PZ启动子A-13G各基因型的PZ水平与对照组无明显差异（P＞0.05）。4.AIS与吸烟、高血压、高血脂及糖尿病这些危险因子明显相关（P0.01）。结论：1.血浆PZ水平与AIS相关,表明PZ的缺乏可能是急性缺血性脑卒中疾病存在的一个危险因素。2.PZ启动子A-13G位点A等位基因频率及基因型与AIS无相关性，显示PZ基因多态性A-13G位点可能不参与AIS疾病的发生、发展。3.PZ基因G79A位点AA基因型和A等位基因的频率与AIS呈负相关，表明AIS 患者PZ基因内含子G79A位点存在G→A突变。4.PZ基因G79A位点基因型AA、GA、GG中的AA基因型的血浆PZ水平与AIS负相关，提示AA基因型的PZ水平可能在血栓性疾病中通过表达