人工诱导日本鳗鲡成熟过程中血清及性腺内类固醇激素含量的.PDFVIP

文章编号：１６７４５５６６（２０１８）０１００４８０７ ＤＯＩ：１０．１２０２４／ｊｓｏｕ．２０１７０４０２００３ 人工诱导日本鳗鲡成熟过程中血清及性腺内类固醇激素含量的变化 １ ２ １ １ １ １ 蒲金成 ，湛　嘉 ，刘登攀 ，杜　力 ，黎原谷 ，刘利平 （１．上海海洋大学省部共建水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室，上海　２０１３０６；２．宁波市检验检疫科学技术 研究院，浙江 宁波　３１５０１２） 摘　要：为分析日本鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌｌａｊａｐｏｎｉｃａ）经过多次注射鲤鱼脑垂体和人绒毛膜促性腺激素后，血清及性腺 组织中性类固醇激素的含量及变化，采用超高效液相色谱串联质谱联用（ＵＰＬＣＭＳ／ＭＳ）对血清内６种类固 醇激素［睾酮（Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ，Ｔ）、１７羟基孕酮（１７ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，１７ＯＨＰ）、１７，２０二羟基４孕烯３ α α α α β 酮（１７，２０ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ４ｐｒｅｇｎｅｎ３ｏｎｅ，ＤＨＰ）、雌酮（ｅｓｔｒｏｎｅ，Ｅ）、雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ１７，Ｅ）、雌三醇（ｅｓｔｒｉｏｌ， α β １ β ２ Ｅ）］以及性腺中４种类固醇激素（Ｔ、ＤＨＰ、Ｅ、Ｅ）进行研究。结果表明，血清及性腺组织样品平均回收率分 ３ ２ ３ 别为８６．９％～９８％、７５．６％～８８．１％；方法检出限（Ｓ／Ｎ＞１０）分别为０．１ｎｇ／ｇ、０．１ｎｇ／ｍＬ。对样品进行测定， 结果表明，随着日本鳗鲡性腺发育，实验组日本鳗鲡血清及性腺中类固醇激素的含量呈逐步增加的趋势，其 中，实验组日本鳗鲡血清中除Ｅ（难产时含量最高）外，其他５种类固醇激素均在产卵时含量最高；实验组日 ３ 本鳗鲡性腺内Ｅ及ＤＨＰ在难产时含量最高。对照组日本鳗鲡血清内Ｅ、Ｅ 以及性腺内Ｅ、Ｅ在整个实验 ２ １ ３ ２ ３ 周期均未检测到。应用本方法对日本鳗鲡血清及性腺内类固醇激素进行定量分析，具有灵敏、高回收率、准 确、稳定等特点，研究结果不仅对日本鳗鲡性腺发育过程中性类固醇激素的研究有了初步的认识，更对其他硬 骨鱼类性腺发育过程中体内激素变化的研究具有重要参考意义。 关键词：类固醇激素；日本鳗鲡；超高效液相色谱串联质谱；性腺；血清 中图分类号：Ｓ９１７　　　文献标志码：Ａ ［５］ 　　类固醇激素（Ｓｔｅｒｏｉｄｈｏｒｍｏｎｅｓ）又称甾体激 相色谱质谱法（ＧＣＭＳ） 和液相色谱串联质谱 ［６］ 素，该类激素对增强鱼体机体发育和改善生产性 法（ＬＣＭＳ／ＭＳ） 等。其中，酶联免疫法灵敏度 能具有重要的作用。鱼类性腺发育过程中，往往 较高、快速简便，但存在交叉反应及假阳性问题； 伴随着多种类固醇激素含量的变化，激素水平与 液相色谱法选择性差，灵敏度也达不到要求；放 性腺发育关系密切。 ［１］ 射性免疫法重复性相对较差，交叉反应复杂；气 ＤＵＦＯＵＲ等 研究发现，性 类固醇激素雌二醇（Ｅ）、睾酮（Ｔ）等对未注射激 质联用法样品前处理过程比较复杂，而且对不易 ２ 素的欧洲鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌｌａａｎｇｕｉｌｌａ）的性腺发育存 挥发激素的检测效果较差。应用 ＵＰＬＣＭＳ／ＭＳ 在反馈调节作用；１７２０二羟基４孕烯３酮是 方法检测，无需进行衍生化，将