第章转基因表达演示课件讲稿.pptVIP

第9章 转基因沉默机制 一、植物转基因的一些问题 1. 转基因的沉默, 技术和科学问题，涉及到转基因的应用。 2．转基因植物对生态环境的影响和转基因食品的安全性等问题。 外源基因与受体基因组整合，但该基因不表达或表达水平降低，或者植物新获得的遗传特性随着植物自身的繁殖在后代中又消失，这种现象转基因沉默（transgene silencing）或转基因失活（transgene inactivation）。 对于育种来说，这无疑是不受欢迎的实质性障碍。 对于基因表达来说，转基因植株为研究目的基因的表达调控提供了优良的材料。通过深入研究可加深理解自然植物在DNA水平上调控基因的表达，或在细胞质中通过mRNA水平来调控基因的表达。 二、转基因沉默的可能机制 转基因沉默并不是所转化的基因发生了丢失或突变，而是整合进植物基因组的外源基因在转化体的当代或其后代中出现了基因失活或表达受到抑制的现象。 转基因的拷贝数和构型 转基因在基因组中的整合位点 转基因的转录水平和翻译水平 环境因子对转基因表达的作用 转基因沉默主要分为两类， 转录水平的基因沉默（transcriptional gene silencing，TGS），发生在核内 转录后水平的基因沉默（Posttranscriptional gene silencing，PTGS） 发生在细胞质中 都是核酸的相互作用，即DNA-DNA，RNA-DNA，RNA-RNA。 Gene silencing in transgenic plant ? Transcriptional gene silencing (TGS) ? TGS mediated by DNA methylation ? TGS mediated by surrounding heterochromatin ? TGS mediated by copy number of insert ? TGS mediated by endogenous repetitive sequences ? Posttranscriptional gene silencing (PTGS) ? PTGS mediated by sense transgenes ? PTGS mediated by antisense transgenes ? PTGS mediated by DNA/RNA viruses 1．DNA的拷贝数和其结构 转基因沉默与转基因的拷贝数和其构型有关。 DNA-DNA相互作用。 多拷贝的整合方式并未使基因表达水平有所增加，反而使DNA发生甲基化或其他原因引起基因失活。农杆菌介导的转化方法比DNA 直接转化法所产生的拷贝数低。外源基因的拷贝数低也并一定能导致基因的充分表达，所以转基因拷贝数的多少对基因表达没有定论。倾向于多拷贝导致基因沉默。 转录水平的基因沉默 Green fluorescent protein (GFP) GFP sources from jellyfish Aequorea victoria GFP as a new vital reporter in plant for detection in living cell by light at 395 or 470 nm Small molecular (26.9 KD) and fusion at both N-and C- terminal provide protein localization and intercellular protein trafficking Transgenic Barley, 2N=14 Seeding of line ? GFP expression on root tips in different transgenic barley lines pc nc I + A nc I pc + E D pc nc I Amplified PCR with GFP primers for transgenic barley ? Molecular analysis of T1 generation for gfp gene C A1 A3 A2 D F1 F2 C E Igri ? GFP expression and inheritance on pollen in T1 and T2 generation 5S 5S 7L 7L Line E Fluorescent in situ hybridization ? Physical location of GFP