制备级液相层析法分离精制水果中之花青素.PDFVIP

行政院國家科學委員會專題研究計畫 成果報告 製備級液相層析法分離精製水果中之花青素 計畫類別：個別型計畫 計畫編號：NSC92-2622-E-002-009-CC3 執行期間：92年06月01日至93年09月30日 執行單位：國立臺灣大學化學工程學系暨研究所 計畫主持人：黃世佑 計畫參與人員：盧秀青 報告類型：精簡報告 處理方式：本計畫為提升產業技術及人才培育研究計畫，不提供公開查詢 中 華 民 94年5月30日 國 國科會補助提升產業技術及人才培育研究計畫成果精簡報告 學門領域：化學工程 計畫名稱：製備級液相層析法分離精緻水果中之花青素 計畫編號：NSC92-2622-E-002-009-CC3 執行期間：92年七月一日至93六月三十日 執行單位：台灣大學化學工程學系 主 持 人：黃世佑 參與學生： 已發表論文或已申請之專利 工作內容 姓 名 年 級 (大學部、碩(含大學部專題研究論文、碩博 士班、博士 士論文) 班) 盧秀青 碩士班 萃取、快速層析、 FRAP、HPLC 合作企業簡介 合作企業名稱：嘉年生化產品有限公司 計畫聯絡人：林景寬 資本額：二千六百萬元 產品簡介：酵素、天然色素、微生物製劑、生化肥料、植物萃取物 網址：/framec.htm 電話：(04 研究摘要： 本研究從桑椹果中萃取分離出花青素，並進行抗氧化活性測定。將桑椹果之甲醇萃 取液通入快速液相層析儀(Flash chromatograph)作初步分離，以25% 甲醇(含 1%醋酸)及50% 甲醇(含 1%醋酸)溶離出F25 、F50 兩部分，再利用Reverse Phase Liquid Chromatography 分 析其中之花青素，並以半製備級高效液相層析管柱分離純化出花青素，再經由LC/MS 確認 鑑定花青素之結構。抗氧化活性測定方面，以FRAP(Ferric Reducing Ability of Plasma)及抑 制H O 誘發老鼠腦漿脂質過氧化(Lipid peroxidation)等方法，評估甲醇粗萃取物及快速層析 2 2 儀分離出的F25 和F50 之抗氧化活性。 人才培育成果說明： 參與學生能熟悉天然物萃取分離的操作、抗氧化活性能力的測定，及其中相關的原 理。對於天然物的萃取分離方面，學生能運用溶劑的極性不同及pH值的差異萃取、分離目 標化合物；在儀器操作方面，能熟悉快速層析儀、高效液相層析儀、分光光度計……等等 相關儀器的操作及原理；在抗氧氧化活性測定方面，藉由了解自由基在人體的機制，明白 目前多種抗氧化活性測定方法的原理與操作，例如：FRAP、TEAC、ORAC……等等，在動物 細胞的實驗上，亦有接觸了解的機會，例如，實驗中所使用的H2O2誘導老鼠腦部均質液過 氧化的操作及原理。 技術研發成果說明： 1. 20克新鮮桑椹果實使用200ml甲醇萃取，可得甲醇粗萃取物。甲醇粗萃物經快速液相 層析作進一步分離，快速層析儀流動壓力設定為0.05 MPa 。先以200ml 5% methanol (1% acetic acid) (Tedia, U.S.A.)沖洗管柱，做預平衡，再將濃縮液通入填充有Cosmosil 75C18-OPN gel (Nacalai Tesque, Japan) 120*40mm 的管柱中，以250ml 5% methanol (1% acetic acid)融離 出醣類及其他水溶性化合物；再以700ml 25% methanol (1% acetic acid)融離，標示為F25 ； 其次以450ml 50% methanol (1% acetic acid)融離，標示為F50 ；然後以400ml 100% methanol (0.1