PPAR-γ配体对氧化应激诱导大鼠心肌炎症反应的抑制效应及相关分子机制的研究.pdf

中国医学科学院北京协和医学院博l：论文 应的抑制效应及相关分子机制的研究 中文摘要 目的：第一部分：采用氧化剂H202模拟氧自由基刺激大鼠心肌细胞，建立氧 化应激诱导心肌细胞炎症反应的损伤模型。以体外原代培养的新生大鼠心室肌细胞 为模型，从细胞生物学方面观察H202对心肌细胞的损伤效应。第二部分：在第一 部分的基础上，探讨过氧化物酶增殖体活化受体吖(PPAR-一、／)配体在调节氧化应激 诱导心肌炎症反应中的作用及可能的细胞保护机制。 方法：第一部分：用机械解离法和酶消化法分离培养新生大鼠心室肌细胞，采 用差速贴壁分离技术和化学药物抑制法进行纯化。倒置相差显微镜下动态观察细胞 形态，台盼蓝染色法测定细胞存活率，并用免疫荧光细胞化学技术鉴定心肌细胞纯 度。M1vr法检测不同浓度H202对新生大鼠心肌细胞活力的影响。采用缩时录像机 8050对培养的心肌细胞动态进行录像，采集搏动图像，观察搏动情况并计数搏动频 率。第二部分：第一部分的基础上，观察H202在不影响心肌细胞活性的作用浓度 TNF．a与LIX Western 与合成配体吡格列酮对TNF．a与LIX表达的影响。利用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测H202对核转录因子NF．r,B的效应；WesternBlot检测H202处理组 响。 响；15d．PGJ2和吡格列酮以及H202对心肌细胞内热休克转录因子HSFlDNA结合 活性的影响以及与NF．r,B信号通路的关系。 结果：第一部分：(1)成功地分离培养原代新生大鼠心室肌细胞，细胞存活率 95％以上；差速贴壁分离后，倒置显微镜下观察贴壁后心肌细胞呈梭形、菱形或多 中国医学科学院北京协和医学院博上论文 角形。8h后即可观察到部分心肌细胞自发性搏动，24h后心肌细胞己全部贴壁，90％ 以上搏动，48h心肌细胞聚集成簇，细胞搏动趋向同步化。免疫荧光染色鉴定心肌 细胞来源及细胞纯度达95％以上，并可见心肌特异性横纹结构。(2)正常培养条件 下，在两周不同培养时间内心肌细胞的搏动频率无统计学差异，表明在观察期限内 制心肌细胞活性，具有统计学意义(尸0．05)。(4)通过采集的搏动图像，观察并 第二部分：(1)100Imaol／L 诱导TNF．a和LIX的生成(P0．05)。(2)100H202呈时间依赖性地激活 Imaol／L 胞浆内Ir,Ba磷酸化水平并促进其降解(氏0．05)。(3)15d．PGJ2与吡格列酮呈浓度 51maol／L 性，而在相同浓度(10 响15d．PGJ2对NF．r,B的作用。(6)5 lunol／L 对NF．r,B的抑制效应均未被GW9662阻断。 结论：(1)NF．r,B信号途径介导了氧化应激诱导大鼠心肌细胞分泌炎性因子 (3)1 制氧化应激诱导的炎症反应，在转录水平抑制炎性因子的表达。 中困医学科学院北京协和医学院博．1：论文 关键词：心肌细胞；搏动频率；过氧化物酶增殖体活化受体吖；氧化应激；炎症； 缺血再灌注；肿瘤坏死因子；化学趋化因子；NF．1出；HSFI 中国医学科学院北京协和医学院博}：论文 Effectsandmechanismsof peroxisome on receptor-Y(PPAR-T)ligandsinflammatoryresponse inducedoxidativestressinratcardiac by myocytes ABSTRACT Part ausefultoolfor the Objectives peroxide(H202)is studying one：Hydrog