低温处理后不同竹种cDNA分子水平上的变化和聚类分析.docVIP

低温处理后不同竹种cDNA分子水平上的变化和聚类分析 　　摘要：以慈竹和硬头黄竹等１２个竹种为材料，采用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法，研究低温胁迫后不同竹种ｃＤＮＡ分子水平上的变化。结果是低温处理后，不同竹种的ｃＤＮＡ经不同引物扩增后，其ＲＡＰＤ－ＰＣＲ谱带的变化出现４种类型，即有的竹种出现原有ＲＡＰＤ－ＰＣＲ谱带的缺失、新谱带的出现以及原有谱带强度的增强和减弱，有的竹种ＲＡＰＤ－ＰＣＲ谱带未发生改变，这表明低温处理后不同竹种在分子水平上确实发生了变化，这种变化与低温胁迫有关，且因竹种而异。 　　关键词：竹；低温胁迫；ｃＤＮＡ水平变化；聚类分析 　　中图分类号：Ｓ７９５ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11407－1484-04 　　 　　Variation and Clustering Analysis about cDNA of Bamboo Treated by Cold 　　 　　ＨＵ Ｓｈａｎｇ－ｌｉａｎ１，ＣＡＯ Ｙｉｎｇ１，ＤＵＡＮ Ｎｉｎｇ１，ＬI Ｙｉ１，ＣＨＥＮ Ｑｉ－ｂｉｎｇ２，ＬＵ Ｘｕｅ－ｑｉｎ１，ＪＩＡＮＧ Ｙａｏ１，２ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｐａｔｔｅｒｎｓ ａｎｄ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃＤＮＡ ｆｒｏｍ ｔｗｅｌｖｅ ｂａｍｂｏｏ ｓｐｅｃｉｅｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｎｅｏｓｉｎｏｃａｌａｍｕｓ ａｆｆｉｎｉｓ ａｎｄ Ｂａｍｂｕｓａ ｒｉｇｉｄａ ｅｃｔ．， ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｄｉｆｆｅｒｅｄ ｆｒｏｍ ｓｐｅｃｉｅｓ ｔｏ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ， ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｒ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ｏｆ ｎｅｗ ｏｆ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｂａｎｄｓ， ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｉｎｇ ｏｒ ｗｅａｋｅｎｉｎｇ ｏｆ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ． Ｈｏｗｅｖｅｒ， ｎｏ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｂａｎｄｓ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｓｏｍｅ ｓｐｅｃｉｅｓ． Ｔｈｅ ｐａｔｔｅｒｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＲＡＰＤ－ＰＣＲ ｂａｎｄｓ ｗｅｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂａｍｂｏｏ ｓｐｅｃｉｅｓ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｂａｍｂｏｏ；ｌｏｗ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｓｔｒｅｓｓ；ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｃＤＮＡ；ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ 　　 　　在低温胁迫下植物体内的可溶性糖［１］、可溶性蛋白质和游离脯氨酸、保护酶活性［２］等常发生变化。以往对竹子抗寒性的研究，主要集中在自然条件下与竹子抗寒性有关的生理生化指标的分析上［３－６］，而分子水平的变化鲜见报道，本文以慈竹、硬头黄竹等１２种竹子为材料，采用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术，研究低温胁迫后不同竹种ｃＤＮＡ水平上的变化，为竹子抗寒机制的研究提供理论依据。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　供试材料采自四川青神竹艺城，分别为慈竹、硬头黄竹、小琴丝竹、青皮竹、粉单竹、钓鱼竹、罗汉竹、凤尾竹、斑竹、实心竹、苦竹、巨竹，共计１２种竹子。 　　１．２处理方法 　　选取长势一致的枝条，将其剪成３０ ｃｍ长的枝段，洗净擦干，石蜡封口，置于低温冰箱中－１５处理１２ ｈ，每个样品设置３次重复。处理后将叶片于液氮中速冻３０ ｍｉｎ后保存于－８０冰箱。将未处理的枝条叶片于液氮中速冻３０ ｍｉｎ后保存作为对照。 　　１．３不同竹种叶片总ＲＮＡ的提取和ｃＤＮＡ的合成 　　１．３．１叶片总ＲＮＡ的提取将叶片置于液氮中迅速研磨，将研碎的粉末迅速转入１．５ ｍＬ ＥＰ管中，加入Ｔｒｉｚｏｌ试剂，室温下放置１０ ｍｉｎ；４ １１ ８００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ；取上清，加入２００ μＬ氯仿，剧烈混匀，室温下放置１０ ｍｉｎ；４ １１ ４００ ｒ／ｍｉｎ离心１５ ｍｉｎ；取上清并加入５００ μＬ异丙醇，混匀后于４ １１ ４００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ；去上清，７５％乙醇洗ＲＮＡ沉淀；干燥ＲＮＡ沉淀；加入ＤＥＰＣ处理水溶解ＲＮＡ。 　　１．３．２ｃＤＮＡ的合成ｃＤＮＡ合成反应由Ｑｉａｎｇｅｎ公司的Ｏｍｉｎｉｓｃｒｉｐｔ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ ｆｏｒ 　　ｆｉｒｓｔ－ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ