培氟沙星抗体的制备.docVIP

培氟沙星抗体的制备 　　摘要：为了制备培氟沙星(PFLX)抗体，采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将培氟沙星分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联，制备免疫抗原PFLX-BSA和检测抗原PFLX-OVA，用PFLX-BSA免疫小鼠以获得高效价的抗体。结果显示，免疫抗原PFLX-BSA紫外光谱具有药物和蛋白的叠加特性，其最大吸收峰在277.5nm处，说明载体蛋白BSA与PFLX成功偶联，可用于动物免疫。检测抗原PFLX-OVA最大吸收峰在275nm处，说明载体蛋白OVA与PFLX成功偶联，可用作检测抗原进行包被。间接ELISA检测结果表明，所得小鼠抗血清效价较高，均达1∶32 000以上，说明有特异性抗体产生。该研究成功制备了抗培氟沙星抗体，也进一步证明药物偶联成功。 　　关键词：培氟沙星；免疫；多克隆抗体 　　中图分类号：R978.1 文献标识码：A 文章编号：0439－８11406－1222-03 　　 　　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｃｌｏｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ ＰＦＬＸ 　　ＬＩＡＮＧ Ｓｈｕ－ｚｈｅｎ，ＳＵＮ Ｘｉｕ－ｍｅｉ，ＷＥＩ Ｄｏｎｇ，ＧＵＯ Ｙａｎ－ｃｈｕｎ 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｍｕｌｔｉｃｌｏｎｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ ＰＦＬＸ． ＰＦＬＸ ｗｅｒｅ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ ａｎｄ ｏｖａｌｂｕｍｉｎ ｂｙ ｕｓｉｎｇ Ｎ－ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ ａｃｔｉｖｅｄ ｅｓｔｅｒ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ ＰＦＬＸ－ＢＳＡ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ＰＦＬＸ－ＯＶＡ． Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｉｍｍｕｎｉｚｅｄ ｗｉｔｈ ＰＦＬＸ－ＢＳＡ ｔｏ ｏｂｔａｉｎ ｔｈｅ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｔｉｔｅｒ． Ｔｈｅ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ ＰＦＬＸ－ＢＳＡ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｔａｃｋｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｐｅａｋ ｗａｓ ２７７．５ ｎｍ，ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＳＡ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ＰＦＬＸ ａｎｄ ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ａｎｉｍａｌ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｎ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｐｅａｋ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ＰＦＬＸ －ＯＶＡ ｗａｓ ２７５ｎｍ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ＯＶＡ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ＰＦＬＸ ａｎｄ ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｔａｋｅｎ ａｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｆｏｒ ｃｏａｔｉｎｇ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＥＬＩＳＡ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｔｉｔｅｒｓ ｏｆ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ａｎｄ ｒｅａｃｈｅｄ ｏｖｅｒ １∶３２ ０００，ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ． Tｈｅ ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ＰＦＬＸ ｗａｓ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｐｒｅｐａｒｅｄ， ｗｈｉｃｈ ｆｕｒｔｈｅｒ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ＰＦＬＸ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｏｕｐｌｅｄ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： pｅｆｌｏｘａｃｉｎ； ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ； ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ 　　 　　氟喹诺酮类药物是一类广谱高效抗菌药，几乎适用于临床常见的各种细菌感染性疾病。但由于该类药物的广泛应用，且常伴有不合理用药和滥用药情况的发生，因ＦＱs残留而产生的不良反应问题越来越多。ＦＱs残留不但对人体有直接的危害，如中枢神经系统、循环系统、消化系统、泌尿系统、呼吸系统的不良反应、皮肤过敏反应及光敏反应、软骨毒性、生殖毒性、跟腱炎等［１］，更为严重的是动物性食品中较低浓度的药物残留通过食物链向人类传播，容易诱导人类致病菌对其耐药性的增强，从而不利于该类药物在人类疾病的治疗［２，３］。同时，耐药菌株传递所带来的危害性，使新开发的ＦＱs类药品的市场周期大大缩短，并且已发现某些ＦＱs具有潜在致癌性［４］。ＦＱs在动物性食品中的残留及耐药性问题已引起世界各国的普遍