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大叶木姜子多糖含量测定与抑菌作用研究 　　摘要：从大叶木姜子中提取精制多糖，测定出大叶木姜子多糖对葡萄糖的换算数据，用蒽酮－硫酸比色法测定计算多糖的含量；采用Ｆｅｎｔｏｎ反应体系为模型，研究多糖对细菌和真菌的抑制作用；采用滤纸片固定反应时间法研究多糖的体外抑菌作用。测得大叶木姜子多糖含量为４．８８％，多糖对金黄色葡萄球菌有较好的抑制作用，对酵母菌、灰绿曲霉和黑曲霉有一定的抑制效果。 　　关键词：大叶木姜子；多糖；含量测定；抑菌作用 　　中图分类号：S476+.9文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11401－0076-03 　　 　　Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｎｔｉ－ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｆｒｏｍ Ｌｉｔｓｅａ ｃｈｕｎｉｉ Ｃｈｅｎｇ ｖａｒ． ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｈ．Ｓ．Ｋｕｎｇ 　　 　　ＨＡＮ Ｊｕｎ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｌｉｔｓｅａ ｃｈｕｎｉｉ Ｃｈｅｎｇ ｖａｒ． ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｈ．Ｓ．Ｋｕｎｇ， ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｗａｙ ｏｆ ａｎｔｈｒｏｎｅ-ｓｕｌｐｈｕｒｉｃ ａｃｉｄ celorimetry． Ｉｔｓ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｎｄ ｆｕｎｇｕｓ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ Ｆｅｎｔｏｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ． The bacteriostasis in vitro was studied by filter paper fixing the reaction time. Ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｔｓｅａ ｃｈｕｎｉｉ Ｃｈｅｎｇ ｖａｒ． ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｈ．Ｓ．Ｋｕｎｇｒｅａｃｈｅｄ ４．8８％． Ｉｔ ｈａｄ ｇｏｏｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Sｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ certain ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ yeast， Ａｓｐｅｎｇｉｌｌｕｓ glaucus ａｎｄ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌｉｔｓｅａ ｃｈｕｎｉｉ Ｃｈｅｎｇ ｖａｒ． ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｈ．Ｓ．Ｋｕｎｇ； ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ； ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ； ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ 　　 　　大叶木姜子Ｈ．Ｓ．Ｋｕｎｇ），樟科木姜子属植物，灌木或小乔木。用于治疗风寒湿痛、跌打肿痛、产后水肿和寒泻，对心血管疾病也有一定的疗效［１］。多糖是一类免疫活性物质，具有抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫、抗衰老、抗菌、抗凝血、抗辐射等药理作用［２－５］。本研究采用石油醚去脂―９５％乙醇去杂―热水提取―活性炭去色素的提取工艺，从大叶木姜子中提取多糖，测得大叶木姜子多糖对葡萄糖的换算因子，用蒽酮―硫酸比色法测定并计算大叶木姜子多糖的含量，用于在实验室培养出来的细菌和真菌的抑制作用，期望为大叶木姜子的综合开发利用提供参考。 　　１材料与方法 　　１．１仪器、用品及材料 　　１．１．１仪器７２１分光光度计、ＵＶＰｒｏｂｅ－２５５０型紫外可见光光度计、电子天平、ＤＺＫＷ－Ｄ－２型数显电热恒温不锈钢水浴锅、离心机、蒸馏装置、抽虑装置、医用手提式压力锅、冰箱、ＧＸＺ型智能光照培养箱。 　　１．１．２材料大叶木姜子采摘地点为云南省文山州西畴县董马乡七角巷，采摘时间为２００８年４月中旬。灰绿曲霉、青霉、黑曲霉用沙氏真菌培养基培养，菌种来源于微生物室制备；酵母菌来源于白酒中；金黄色葡萄球菌用高盐肉汤培养基培养。 　　１．１．３试剂无水葡萄糖；蒽酮；硫酸、活性炭；醋酸铅；硫酸钠；无水乙醇、石油醚等。 　　１．２方法 　　１．２．１大叶木姜子多糖的提取与精制取干燥大叶木姜子粉末１００ ｇ，置抽滤装置中，加入石油醚３５０ ｍＬ，回流脱脂。用９５％乙醇回流提取３次，每次６倍量，残渣挥干溶剂后，再蒸馏回流提取３次，每次６倍量，合并提取液，过滤、加入０．５％活性炭脱色１次，加入氯仿－正丁醇液轻摇，静置取多次，除去蛋白质。用离心机在２ ５００ ｒ／ｍｉｎ转速下离心１次，提取上层澄清液，加入醋酸铅直至溶液不产生沉淀为止，过量的醋酸铅加适量的硫酸钠除去，再在２ ５００ ｒ／ｍｉｎ转速下离心１次，提取上层清液。加热溶液浓缩至１／５体积，滤液加３倍量无水乙醇静置一夜后蒸馏提纯，得到大叶木姜子多糖。 　　１．２．２大叶木姜子多糖含量测定 　　１）