代谢控制和育种教学教材.pptVIP

概念：抗反馈调节突变株是一种解除合成代谢反馈调节机制的突变型菌株。其特点是所需产物不断积累，不会因其浓度超量而终止生产： 如果由于结构基因突变而使变构酶成为不能和代谢终产物相结合的，便是失去了反馈抑制的突变，称为“抗反馈突变型”； 如果是由于调节基因突变引起调节蛋白不能和代谢终产物相结合而失去阻遏作用的，称为“抗阻遏突变型”。 一般而言，抗阻遏突变结果使胞内酶有可能成倍增长，而抗反馈突变的胞内酶量没有什么变化。但从作用效果上讲，均造成终产物大量积累，而且往往两种突变同时发生，难以区别。通常就统称为“抗反馈调节突变型”。 4.5 抗反馈调节突变株的选育 在实际应用中，抗反馈调节突变株的选育可以通过以下几个方面： 从遗传上解除反馈调节 (如各种抗性和耐性育种、回复突变子的应用等) 截流或减少终产物堆积 (如借助营养缺陷型或采用渗漏缺陷型等) 移去终产物 (借助膜透性的突变等) 4.5 抗反馈调节突变株的选育 回复突变引起的抗反馈调节突变株 耐自身产物突变株选育 抗终产物结构类似物突变株的选育 累积前体和耐前体突变株的选育 4.5 抗反馈调节突变株的选育 1. 概念：一种可逆性突变，即具有突变型基因的个体通过再突变又成为野生型表型的过程。 2. 产生的原因 (1) 原有基因的回复突变：指基因内部位点突变引起的逆向突变现象，分以下两种情况： ① 同一基因内的同一个或几个碱基的突变引起的回复，消除了原有突变效应，完全恢复野生基因型及其功能，即真正的回复突变； ② 在同一基因内，但不同的位点碱基的变化，改变了基因的核苷酸序列，补偿了原有突变点已失去的功能，使其出现野生表型，称为基因内抑制突变。 4.5.1 回复突变引起的抗反馈调节突变株 (2) 非原有基因的回复突变 概念：在DNA分子链上的一个基因突变成为突变型，随后在邻近的基因某位点碱基发生突变，抑制了前一个突变基因的效应，重新出现野生型的表型，又称为抑制基因突变。 4.5.1 回复突变引起的抗反馈调节突变株 2. 产生的原因 区别基因回复突变和抑制基因突变的方法 将回复突变菌株和野生型菌株进行回交试验或杂交重组试验，观察它们的子代是否有突变型出现： ① 有同样的突变型重新出现，说明回复突变和原来突变型不在同一位置而是分开的，属于抑制基因回复突变株； ② 如果杂交后代没有产生突变型，表明回复突变的位置与原突变型位点相同，是真正的回复突变。 4.5.1 回复突变引起的抗反馈调节突变株 第四节 代谢调节控制育种 7 工业微生物代谢控制育种 第四节 代谢调节控制育种 代谢调节控制育种通过特定突变型的选育，达到改变代谢通路、降低支路代谢终产物的产生或切断支路代谢途径及提高细胞膜的透性，使代谢流向目的产物积累方向进行。 抗反馈调节突变株选育 1. 概念：指操纵基因或调节基因突变引起酶合成诱导机制失灵，菌株不经诱导也能合成酶、或不受终产物阻遏的调节突变型。 调节基因突变，致使不能形成活性化的阻抑物； 操纵基因突变，丧失和阻抑物结合的亲和力。 因此，可以利用一些易同化碳源或价廉易得的碳源作为基质生产所需的诱导酶类。 2. 筛选方法及实例 (1) 限量诱导物恒化培养 (2) 循环培养 (3) 鉴别性培养基的利用 (4) 筛选 4.1 组成型突变株的选育 (1) 限量诱导物恒化培养 将野生型菌种经诱变后移接到低浓度诱导物的恒化器中连续培养 由于底物浓度低到对野生型不发生诱导作用，所以诱导型的野生菌不能生长 突变株由于不经诱导即可产生诱导酶而利用底物，因而得以生长成为组成型菌株 4.1 组成型突变株的选育 2. 筛选方法及实例 (2) 循环培养 含有诱导物 的培养基 不含诱导物 的培养基 交替连续循环培养 由于组成型突变株在两种培养基上都能产酶，生长逐渐占优势 4.1 组成型突变株的选育 2. 筛选方法及实例 (3) 鉴别性培养基的利用 甘油作惟一碳源 涂布诱 变孢子 悬液 喷上O-硝基苯酚-β-D-半乳糖苷 (ONPG) 组成型 诱导型 4.1 组成型突变株的选育 2. 筛选方法及实例 (4) 筛选 经诱变剂处理后的菌体移接到含有诱导能力低，但能作为良好碳源的诱导物的培养基中培养，突变体能良好生长，野生型不能生长。 例如：利用苯-β-半乳糖(PG)筛选β-半乳糖苷酶组成型突变株。 4.1 组成型突变株的选育 2. 筛选方法及实例 概念：抗分解阻遏和抗分解抑制的突变株。 分解代谢阻遏现象：在初级或次级代谢中都存在，其含义是指代谢过程中酶的合成往往受高浓度的葡萄糖或其他易分解利用的碳源或氮源所抑制。 选育抗分解调节突变株(如碳源、氮源或磷酸盐分解调节)，其实就是筛选合成酶的产生不受碳、氮、磷的代谢阻遏或抑制的突变株，使抗生素提前到菌体生长期开始合成，延