去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检测方法（征求意见稿）.doc

附件5： 化妆品中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的 检测方法 （征求意见稿） 1 适用范围 本规定了化妆品中、、的液相色谱液相色谱串联质谱方法。 本适用于中、、的测定本方法中肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的检出限为2mg/L，定量下限为5mg/L；取1g样品时的检出浓度为0.2(g/g，最低定量浓度为0.5(g/g。2 方法提要 化妆品试样经盐酸水溶液提取，正己烷除脂，低温高速离心后，采用高效液相色谱/荧光检测器定量测定，外标法定量，液相色谱/串联质谱仪定性确证。3 试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为。 3.1 乙腈色谱纯。 3.2 甲酸色谱纯。 3.3 正己烷。 3.4 磷酸。 3.5 磷酸二氢钾。3.8 0.1mol/L盐酸水溶液。3.10 0.05mol/L磷酸盐缓冲液：称取6.8g磷酸二氢钾（3.），加900mL水完全溶解后，用磷酸（3.4）调节pH至3.0，用水至1L，过滤后备用。 3. 标准溶液 3..1 肾上腺素（Epinephrine，C9H13NO3，CAS：51-43-4），去甲肾上腺素（Norepinephrine，C8H11NO3，CAS：51-41-2），异丙肾上腺素（Isoproterenol，C11H17NO3，CAS：7683-59-2）。 3..2 标准储备溶液(＝：称取肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素，分别用0.1mol/L盐酸水溶液（3.）溶解0.1mol/L盐酸水溶液（3.）定容，配制成浓度为1mg/L的标准储备液，4℃冰箱保存。 3..3 混合标准储备溶液(＝：分别量取1.00mL肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素（.11.2）至100mL容量瓶中，用（.8）定容，配制成的混合标准储备溶液，4冰箱保存。0.1mol/L盐酸水溶液（3.）4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪，配荧光检测器。 4.2 液相色谱/串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）。 4.3 分析天平感量0.0001g。 4.4 离心机转速不低于12000r/min。 4.5 超声波清洗器。 4.6 涡旋混合器。 4.7 pH计测量精度±0.02。5 测定步骤 5.1 试样的制备 称取化妆品试样1g（精确至0.1g），加入0.1mol/L盐酸水溶液（.8）定容至10.0mL，剧烈振荡，涡旋1min，加入正己烷（.3）4mL，涡旋1min，超声10min，12000r/min 4℃离心10min，取水层经(m微孔滤膜过滤作为液。 5. 测定 液相色谱参考条件 色谱柱：柱，50mm×4.6mm（i.d.），5(m或相当者；0.05mol/L磷酸盐缓冲液流速：mL/min；进样量：5(L； 荧光检测器激发波长：280nm，发射波长：321nm。 5.2.2 标准工作曲线的制备按浓度从低到高依次经液相色谱测定，以标准溶液浓度为横坐标，标准工作曲线。 采用外标标准曲线法定量测定。.1）分别进样，以保留时间定性，获得目标峰面积。根据标准工作曲线计算被测试样中的含量，待测物的响应值均应在线性范围内。/串联质谱法对阳性样品进行确认。 5.3 阳性结果确证 测定过程中若有阳性结果，可采用液相色谱/串联质谱法进一步确证。 5.3.1 液相色谱参考条件 色谱柱：C18色谱柱，150mm×2.1mm（i.d.），3.5(m，或性能相当者； 流动相：乙腈+0.1%甲酸水溶液=（2+98）； 流速：0.2mL/min； 进样量：20(L。 表1 肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素的保留时间和质谱参数 化合物 保留时间（min） 离子 （V） 离子 （eV） 去甲肾上腺素 2.2 170.2 50 152.2 0 107.2 20 肾上腺素 2.6 184.2 50 166.2 4 107.2 20 异丙肾上腺素 6.7 212.2 60 194.2 5 152.2 15 5.3.3 定性测定 每种被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且试样中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表2规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物。 表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度k） 允许偏差（%） k ≥50% ±20 50% k ≥ 20% ±25 20% k ≥ 10% ±30 k ≤ 10% ±50 6 平行试验 按以上步骤，对同一样品进行平行试验测定。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的1%。 结果计算 试样中、、的含量按式计算获得： 式中