第二章流加发酵与高密度培养教学教材.pptVIP

反应器 HCDC的生物反应器类型包括： 具有底物流加装置的通用式搅拌罐反应器 带有各种内置或外置细胞维持装置的搅拌罐反应器 膜透析反应器 气升式反应器 陶瓷膜摇瓶 透析反应器 反应器 HCDC问题的解决 HCDC遇到的主要问题有： 产物或代谢副产物的积累对生长的抑制 氧的限制 HCDC中培养基粘度不断增加，引起混合不充分 CO2和热量的高释放率 下面以大肠杆菌为例，来探讨如何解决HCDC中的问题。 大肠杆菌HCDC中乙酸的形成 乙酸是大肠杆菌流入中心代谢途径的碳超过生物合成的需要和产生能量超过细胞的容量时产生的。 高浓度的乙酸（如pH7，超过5gL-1）会降低HCDC的生长速率、生物量和可获得的最大细胞密度。 乙酸毒害作用的机理还未被阐明。很有可能是因为抑制DNA、RNA、蛋白质和脂肪的合成。 HCDC遇到的问题 控制比生长速率在产生乙酸的临界值以下 一般可通过控制限制性底物浓度控制比生长速率。 比生长速率临界值： 在复合和半合成培养基中，约为为0.2h-1和0.35h-1； 在合成培养基中，为0.14h-1。 HCDC遇到的问题 减少乙酸合成的方法 选择合适的培养基 例如，甘油比葡萄糖吸收进入细胞的速度要慢，可能会减少流入糖酵解途径的碳，这会极大的减少乙酸的合成。 HCDC遇到的问题 此外，加入某些氨基酸（如谷氨酸、甲硫氨酸），可减轻乙酸的毒害作用。 使用酸和碱调节pH而积累下来的盐会使乙酸的毒害作用加强。 流加发酵与高密度培养 流加发酵 所谓流加发酵，即补料分批发酵(Fed-batch fermentation)，有时又称半连续培养或半连续发酵，是指在分批发酵过程中间歇或连续地补加新鲜培养基的发酵方法 分批、连续、流加操作方式的比较 流加发酵的研究进展 在20世纪70年代以前流加发酵的理论研究几乎是个空白，流加过程控制仅仅以经验为主，流加方式也仅仅局限于间歇或恒速流加 1973年日本学者Yoshida等人首次提出了“Fed-Batch Fermentation”这个术语，并从理论上建立了第一个数学模型，流加发酵的研究才开始进入理论研究阶段 流加发酵所取得的三个方面的重大进展 20世纪70年代中后期对流加发酵过程的动力学解析 结合发酵过程的可测参数对流加过程进行反馈控制（如DO法、CO2法、RQ(呼吸商)法、pH法、代谢物法、萤光法等） 流加发酵的最优化研究 流加发酵最优化研究的核心问题是找出最佳的底物流加方式，以维持发酵过程始终处于最佳状态 流加发酵最优化的研究内容包括： （1）状态方程的建立 （2）目标泛函的确定 （3）最优化底物流加方式的求解 流加发酵的物料衡算式可以表达为： 流加发酵的最优化理论有：格林原理、庞特里金最小值(最大值)原理等 在采用流加发酵技术之前要考虑的两个问题 一、何时采用流加发酵方式？ 二、如何进行底物的流加？ 一、何时采用流加发酵方式？ 所用底物在高浓度时对菌体生长有抑制作用 高菌体浓度培养即高密度培养系统 非生长耦联性次级代谢产物(如产物的合成需要某些营养物质或前体) 利用营养突变体的系统(过量加入营养物只能使菌体迅速生长，而目的代谢产物的产量会减少。而当营养物严重缺乏时，菌体生长受抑制，代谢产物的产量也会减小 ) 营养缺陷型菌株的培养 二、如何进行流加发酵操作？ 1. 流加发酵类型 2. 采用流加发酵应该解决的关键问题？ 3.流加发酵过程中某些重要参数的确定 4.合适的流加发酵类型的确定 5. 流加方式的应用 1. 流加发酵类型 流加发酵的分类 类别 流 加 方 式 无反馈控制 反馈控制 恒流量流加、变流量流加和间歇流加 直接控制流加、间接控制流加 定值控制流加、程序控制流加、最优控制流加 ? 2. 采用流加发酵应该解决的关键问题 (1) 流加什么物质？ ①补充微生物能源和碳源，如在发酵液中添加葡萄糖、 饴糖、液化淀粉。作为消泡剂的天然油脂，有时也能同时起到补充碳源的作用 ②补充菌体所需要的氮源，有机氮或氨水 ③加入某些微生物生长或合成需要的微量元素或无机盐 ④加入酶合成诱导物或前体物质 5. 流加方式的应用 (1) 恒速流加 采用恒流速流加培养时，可得到如下的物料平衡方程式： 细胞平衡： 碳平衡： 产物平衡： 体积平衡： 恒流速流加过程中的流量F的确定： 预试验中所得出的流加时刻菌体对所流加基质的消耗速率 发酵液中残留基质浓度 流加后需要控制的发酵液中的基质浓度 (2) 指数速率流加 在菌体生长阶段采用指数速率流加法的几点假设如下： (a) 发酵罐内为理想混合； (b) 葡萄糖为唯一限制性碳源； (c) 残留菌