第五章化学酶工程介绍与培训.pptVIP

酶工程 Enzyme Engineering;第一节 酶分子的化学修饰;第一节 酶分子的化学修饰;广义：凡是通过化学的方法和手段或是通过化学反应使酶的分子结构发生改变的技术或过程，都可称为酶的化学修饰。 狭义：酶的化学修饰则主要是指在较温和的条件下，以可控的方式使酶同某些化学试剂发生特异反应，从而引起单个氨基酸残基或其功能基团发生共价的化学改变的过程。;酶化学修饰的目的：人为地改变天然酶的一些性质，创造天然酶所不具备的某些优良特性甚至创造出新的特性，扩大酶的应用领域。;酶化学修饰的原理; 酶分子侧链基团的化学修饰 酶分子表面的化学修饰 ;采用一些可溶性的大分子物质通过共价键将其连接到酶分子的的表面，使之在酶表面形成覆盖层，从而使酶的性质发生改变，以满足人们的需要。;酶分子侧链基团的化学修饰;氨基的化学修饰 （赖氨酸）;③;⑤;组氨酸咪唑基的化学修饰;精氨酸胍基的化学修饰;③;色氨酸吲哚基的化学修饰;酪氨酸残基和脂肪族氨基酸残基羟基的化学修饰;④;甲硫氨酸残基的化学修饰;采用一些可溶性的大分子物质通过共价键将其连接到酶分子的的表面，使之在酶表面形成覆盖层，从而使酶的性质发生改变，以满足人们的需要。;聚乙二醇对酶的修饰 （单甲氧基聚乙二醇—MPEG）;聚乙二醇对酶的修饰 （单甲氧基聚乙二醇—MPEG）;MPEG氨基类衍生物;右旋糖酐及右旋糖酐硫酸酯对酶的修饰;羟基活化----溴化氰法;羟基活化----高碘酸氧化法;糖肽对酶的修饰;具有生物活性的大分子对酶的修饰;碳二亚胺法;三氯均嗪法;蛋白质或其他大分子对酶的修饰;影响酶化学修饰的因素;修饰酶的性质;概述;目前模拟酶的研究方向：;酶学基础：Pauling的稳定过渡态理论 酶先结合底物，进而选择性地让底物稳定处于某一特定反应的过渡态，降低反应的活化能，从而加速反应速度。;超分子化学基础---Pederson、Cram、Lehn提出：超分子的形成源于底物和受体的结合，这种结合基于非共价键相互作用，如静电作用、氢键和范德华力等。;模拟酶的分类;环糊精是直链淀粉在芽孢杆菌产生的环糊精葡萄糖基转移酶作用下生成的一系列环状低聚糖的总称，通常含有6~12个D-吡喃葡萄糖单元。 环糊精中各葡萄糖单元均以1,4糖苷键结合成环，空间结构呈锥形圆环。环糊精外缘亲水而内腔疏水，因此能像酶一样提供一个疏水的结合部位。;环糊精;环糊精模拟酶所具有的催化作用（活性）： 水解酶活性 核酸酶活性 转氨酶活性 桥联欢糊精仿酶—氧化和水解酶活性 ;大环聚醚按结构可分为：冠醚、穴醚、球醚。冠醚是指含杂原子的单环化合物，穴醚是指含杂原子的双环化合物，球醚是指含有杂原子的球状大环醚。 大环聚醚模拟酶的活性： 水解酶活性 肽合成酶活性;杯芳烃是由苯酚及其衍生物与甲醛缩合而成，分子上缘由苯环的对位取代基组成，下缘紧密排列着酚羟基，中间是苯环构成的富含π电子的疏水空腔，其上缘亲油，下缘亲水，可与中性分子和极性离子等多种物质结合。 模拟水解酶活性。;金属卟啉可以模拟以金属离子为辅基或辅酶的天然酶。卟啉是含有四个吡咯分子的大环聚合物，主要骨架是卟吩。金属卟啉分子具有以共轭大π电子体系，金属原子价改变为基础的氧化还原性质，因而可作为与分子氧有关的氧化还原酶的模拟酶。;肽酶是模拟天然酶的活性部位，人工合成的具有催化活性的多肽。 环肽在分子识别方面更具有优势。;抗体酶的催化特性;抗体酶的特点;抗体酶的催化作用机制;抗体酶的制备原则;目前制备抗体酶的主要方法：根据催化目的，通过化学反应合成模型化合物（过渡态类似物），并与载体蛋白偶联成人工抗原，制备具有催化活性的单克隆抗体。 拷贝法 化学诱变法。 蛋白质工程技术。 相似分子诱导法。 共价抗原免疫法。;利用过渡态类似物制备抗体酶;使不可能发生的化学反应称为可能。 使苛刻条件下的化学反应在温和条件下实现。 选择性的催化平行反应中的某一反应。 制备蛋白质氨基酸序列快速分析的抗体酶。 制备水解病毒蛋白的抗体酶。 指导未知酶的寻找。 为化学反应的机理研究提供依据。;分子印迹的原理;分子印迹的原理;选定印迹分子和功能性单体，使二者发生互补反应； 在印迹分子—功能性单体复合物周围发生交联聚合； 用抽提法从聚合物中除掉印迹分子。;分子印迹技术的分类;又称非共价法。印迹分子与功能性单体自组织排列，以非共价键自发形成具有多个作用位点的复合物。 功能单体：丙烯酸、丙烯酰胺、含有乙烯基的苯甲酸、苯乙酸、咪唑和吡啶类化合物。甲基丙烯酸;聚合时，印迹分子与功能基团共价结合。识别时，印迹分子与功能基团非共价结合。;分子印迹聚合物的制备;分子印迹酶;Wulff研究??组充分考虑结合态和定向引入催化基团对催化的作用;;;思考题 1 简述酶分子化学修饰的基本原理，及酶化学修饰方法。 2 酶分子被修饰后