苏云金杆菌以色列亚种L-10菌株培养基优化研究.docVIP

苏云金杆菌以色列亚种L-10菌株培养基优化研究 　　摘要：利用单因素筛选和正交试验，对苏云金杆菌以色列亚种Bti-Ｌ－１０高毒菌株的发酵培养基进行了优化，得到其最佳培养基配方为：淀粉３％，氮源Ｂ ０．５0％，氮源Ｃ ０．７５％，氮源Ｄ ４．０0％，氮源Ｇ １．０0％。通过２００ Ｌ和４０ ０００ Ｌ发酵罐分别发酵，发酵液效价分别为３７９ ＩＴＵ／ｍｇ和３２７ ＩＴＵ／ｍｇ，发酵液经过后处理，所得原粉效价分别为８ ９２８ ＩＴＵ／ｍｇ和６ ８３７ ＩＴＵ／ｍｇ。 　　关键词：苏云金杆菌以色列亚种；培养基；优化 　　中图分类号：S482.3+9；TQ453.5 文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11422－4603-03 　　 　　Ｓｔｕｄy ｏｎ ｔｈｅ Ｍｅｄｉａ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． iｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ Ｓｔｒａｉｎ 　　 　　ＬＩＵ Ｆａｎｇ，ＬＩＡＯ Ｘｉａｎ－ｑｉｎｇ，ＺＨＯＵ Ｒｏｎｇ－ｈｕａ，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ－ｇａｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｚｕｎ－ｘｉａ 　　 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｈｉｇｈｌｙ ｔｏｘｉｃ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ Bti-Ｌ－１０ ｓｔｒａｉｎ ｗａｓ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔｓ ａｎｄ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｆｏｒｍｕｌａ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍ ｗａｓ ３．０％ ｓｔａｒｃｈ＋０．５0％ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ Ｂ＋０．７５％ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ Ｃ ＋ ４．０0％ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ Ｄ＋１．０0％ ｎｉｔｒｏｇｅｎ ｓｏｕｒｃｅ Ｇ． Ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｔｏｏｋ ｐｌａｃｅ ｉｎ ２００ Ｌ ａｎｄ ４０ ０００ Ｌ ｆｅｒｍｅｎｔｏｒｓ； ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｂｒｏｔｈ ｗａｓ ３７９ ａｎｄ ３２７ ＩＴＵ／ｍｇ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｐｏｗｄｅｒ ｗａｓ ｍａｄｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｏｗｎ－ｓｔｒｅａｍ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ， ａｎｄ ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ８ ９２８ ａｎｄ ６ ８３７ ＩＴＵ／ｍｇ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄs： Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｓｕｂｓｐ． ｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ； ｍｅｄｉｕｍ； ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ 　　 　　蚊类不仅吸血骚扰，而且是多种严重疾病，如疟疾、丝虫病、黄热病及登革热等的传播媒介［１，２］，化学合成杀虫剂已成为防治蚊类的主要手段。随着化学杀虫剂的过度和广泛使用，蚊类抗药性不断增强，同时也造成环境污染［３］。苏云金杆菌以色列亚种由Ｇｏｌｄｂｅｒｇ和Ｍａｒｇａｌｉｔ于１９７７年发现［４］，已广泛用于蚊蝇幼虫防治，其优点在于可控制１～４龄幼虫，施后见效快持效长，适用于除饮用水外各种水体的蚊类防治，在水体中可自然分解，无污染，不影响非目标生物，对施药者、野生动物及家畜无副作用［５］。湖北省生物农药工程中心菌种室分离到一株对蚊类幼孑孓高毒的Ｂｔｉ－Ｌ－１０菌株，该试验对该菌株培养基进行了优化研究。 　　１材料与方法 　　１．１菌株和培养 　　Ｂｔｉ－Ｌ－１０菌株为湖北省生物农药工程研究中心菌种室分离筛选并保藏；斜面活化培养基为牛肉膏蛋白胨培养基；单因素筛选碳源固定为玉米淀粉，氮源为７种市售农副产品。将菌株接种至牛肉膏蛋白胨斜面培养基，于３０ 培养９６ ｈ备用。 　　１．２方法 　　１．２．１单因素筛选固定玉米淀粉作碳源，用量１％；分取７种市售农副产品作氮源，用量３％。灭菌前调ｐＨ值至７．５，分装于５００ ｍＬ三角瓶，每瓶５０ ｍＬ，0.1 MＰａ灭菌３０ ｍｉｎ。挑取１环菌苔接种于摇瓶中，旋转式摇床振荡培养，温度３０～３２ ，转速２２０ ｒ／ｍｉｎ，培养至芽孢和晶体４０％分离时下摇床，镜检和生物测定发酵液［６］。 　　１．２．２正交试验固定玉米淀粉用量３％，选取Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｇ作氮源，四因素三水平正交试验。固定碳酸钙０．１％，硫酸镁０．０３％，磷酸二氢钾０．０１％，按表１各浓度要求配制培养基，灭菌前调ｐＨ值至７．５，分装于５００ ｍＬ三角瓶，每瓶装量２５ ｍＬ。灭菌、培养同１．２．１，镜检和生物测定发酵液。 　　 　　１．２．３２００ Ｌ发酵罐发酵按正交试验筛选到最佳培养基组分配制好培养基，投料体积１２０ Ｌ，消泡剂０．２％，灭菌前调ｐＨ