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Company Logo LOGO 萼脊兰EF1α基因的克隆及序列分析 答辩人: 学号: 指导老师： 日期：2015.05.12 主要内容 研究背景及意义 材料与方法 结果与分析 讨论 致谢 研究背景及意义 萼脊兰(Sedirea japonica) 是兰科(Orchidaceae)萼脊兰属(Sedirea) 植物，附生草本，茎短，具数枚叶，叶二列，稍肉质或厚革质，总状花序，疏生数朵花。 萼脊兰的花小而素雅，其花色典雅且具有迷人的芳香，观赏期较长，养护简单，且耐寒，故深受人们的喜爱。因此，萼脊兰越来越受到大家的关注，成为了大家研究的热点。 研究背景及意义 研究背景及意义 EF1α是一个主要的翻译延伸因子，调控蛋白质的翻译 过程，基因表达及调控非常保守，在真核生物体内属于数 量较多的一类蛋白。 翻译延伸因子除了在蛋白翻译过程发挥作用外，还具有 很多其他的功能，是一种多功能蛋白因子。 在很多植物中都能够通过克隆得到，但还没有从萼脊兰 中分离出来，本实验期望克隆萼脊兰EF1α基因序列并对 其进行分析，为以后进一步的研究以及相关基因的研究分 析奠定基础。 材料与方法 按照NCBI中登录的植物翻译延长因子同源核苷酸保守序列设计简并 引物， EF1aF: ACATCAACATCGTGGTCATTGG， EF1aR:GCCCTTGTACCAGTCAAGGTTG。 以萼脊兰叶片作为实验材料，采用Trizol法提取萼脊兰总RNA,并利 用RT-PCR技术克隆翻译延伸因子—EF1α。 运用DNAMAN、Primer5.0对EF1α基因进行剪切和简单分析， 利用在线网站NCBI、ExPaSy-Protparam、nps@、SWISS-MODEL等对EF1α编码的蛋白进行同源序列的比对和结构域以及模 体的分析、理化性质的分析、二级结构的分析、三级结构的构建， 利用CLUSTAL X 1．81 和MEGA4．0 软件进行进化树分析，采 用邻接算法进行。 结果与分析 1.萼脊兰总RNA提取结果 RNA条带清晰，且28S条带的亮度大约是18S的两倍，表明RNA无明显降解， 可用于逆转录cDNA 结果与分析 2.PCR产物鉴定 结果显示条带清晰无拖尾现象，在500bp-750bp之间，推测所克隆的基因为所需基因 结果与分析 3.凝胶回收检测 条带的亮度和所点的Marker的亮度差不多表明回收结果不错，可以进行下一步的实验 结果与分析 4.菌液阳性克隆鉴定 有条带且亮度清晰无拖尾现象，大小约620bp,可以送去测序 结果与分析 5.测序结果 结果与分析 6.蛋白二级结构 α-螺旋（Alpha helix）占39.81％,β-转角（Beta turn）占10.68％，延伸链（Extended strand）占21.36％，无则卷曲（Random coil）占28.16％ Company Logo LOGO
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