中药制剂成分分析方法.pptVIP

* * 第一节 含生物碱类成分的分析 一、含生物碱类成分中药制剂的定性鉴别 (一)生物碱的沉淀反应 (1)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加硅钨酸、磷钨酸、磷钼酸试剂数滴，生成（BH+）4[Si（W3O10）4]沉淀（淡黄色或灰白色）、3BHPO412WO32H2O沉淀（白色至褐色）、3BH3PO412MoO32H2O 沉淀（白色至黄褐色，加氨水转变为兰色）。 (2)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘-碘化钾试剂数滴，产生棕色或褐色沉淀， BH+ + I2-K+I- → BI2HI（棕、褐色） + K+ (3)生物碱的酸性水溶液或稀醇（小于50%）溶液中，滴加碘化铋钾、碘化汞钾试剂数滴，产生红棕色沉淀、类白色沉淀。 BH+ + BiI3KI → BBiI3HI（红棕色） + K+ BH+ + HgI2KI → BHgI22HI（类白色） + K+ (二)生物碱的色谱鉴别 1．薄层色谱法 首先用适当的溶剂提取生物碱，提取液经浓缩后直接或经过必要的净化后，点在薄层板上，层析后喷洒生物碱显色剂，再根据生物碱的特性，选择特异的颜色反应或荧光，并应用纯品对照，或标准药材对照，同时须作阴性对照后确定。如用硅胶为吸附剂时，一般应用碱性系统展开剂较多，或使生物碱的薄层分离在碱性环境下进行。 2．纸色谱法 多为薄层色谱所代替，利用多缓冲纸色谱来快速鉴别乌头中双酯类生物碱和醇胺类生物碱有其独到之处。 3．高效液相色谱法 在恒定的高效液相色谱条件下，各种生物碱都具有一定的保留时间，可作为定性鉴别的参数。一般要求取得两个色谱系统的保留时间，或应用二级管阵列检测器作出鉴定。 4．气相色谱法 适用于具挥发性且过热不分解的生物碱分离和鉴定，目前在应用上有一定的局限性。 二、含生物碱类成分中药制剂的含量测定 (一)经典化学方法 1.重量法 重量法测定中药制剂中生物碱多为测定其总生物碱的含量。本法可用于混合总碱、未知结构或分子量相差较大的生物碱的含量测定。缺点是挥发性生物碱不宜用此法，在蒸发提取溶剂或加热、干燥时能分解破坏以及加碱使生物碱游离时可发生水解的生物碱也不可用此法。本法取样量大，得到的残渣在称量的准确度内方可应用。应用本法要求定量的将生物碱提取完全，并尽可能除去杂质，须注意选择合适的提取溶剂。 实例 见P135 苦参片中苦参总碱的测定 2．容量法 (1)酸碱滴定法： a.游离生物碱不溶于水，可先将生物碱溶于过量标准酸溶液中，再用标准碱溶液回滴。 b.游离生物碱能溶于水或水-乙醇溶液中的可直接滴定。 c.生物碱盐在水或乙醇介质中，用强碱溶液滴定。一般使其溶于90％乙醇溶液中，可用标准碱乙醇液滴定，用酚酞作指示剂。 (2)两相滴定法： 因边滴边使游离生物碱溶于有机溶剂中，不致影响终点的观察。更重要的是由于游离生物碱进入有机相，明显地增大了生物碱盐的电离常数pKa。生物碱盐在两相中的水解为 pKa(D)=pKa - log(1+PC)，即与分配系数有关。一般的测定方法是称取生物碱盐类溶于水中(加氯化钠少许)，然后加一定量有机溶剂，用氢氧化钠标准溶液进行滴定，并不断搅拌振摇。常用的有机溶剂有氯仿、乙醚等，以氯仿用的较多，常用的指示剂如酚酞。 如滴定剂选用酸性染料作为生物碱的两相滴定，则称之为酸性染料滴定法。利用在一定的pH条件下，酸性染料能与生物碱结合而定量地被有机溶剂提出，当滴定到达终点时，由于稍过量的酸性染料，使水层产生颜色而指示终点。为了保证酸性染料与生物碱的结合，可在水层中加入缓冲溶液。 BH+ + In- → BHIn 本方法测定生物碱含量时，应注意选择合适的pH、合适的酸性染料和合适的有机溶剂。 酸性染料现以溴酚蓝、溴麝香草酚蓝及溴甲酚绿应用较多。有机溶剂应用最多的是氯仿，其次是苯和二氯乙烷。要求有机溶剂应对生物碱与酸性染料结合物有很好的溶解度。 (3)络合滴定法： 重金属盐类如碘化铋钾、碘化汞钾和碘化镉钾等可使生物碱或其盐生成沉淀，将沉淀溶解，然后用络合滴定剂直接滴定原来沉淀中的重金属；或者滤出沉淀，滴定滤液中剩余的过量的重金属而求得生物碱含量。本测定方法手续繁琐，目前仅应用于原料药材的生物碱含量测定，在中药制剂中应用较少。 (4)沉淀容量法： 利用多数生物碱与硅钨酸、雷氏盐、四苯硼钠等试剂，生成沉淀，组成一