不依赖连接反应的高通量克隆方法-生物资源.pdfVIP

氨基酸和生物资源 ， （）： ２０１３３５４ ４３ ４６ 　 ～ 犃犿犻狀狅犃犮犻犱狊牔犅犻狅狋犻犮犚犲狊狅狌狉犮犲狊 综 述 　　 不依赖连接反应的高通量克隆方法  李华琴，林陈水 ，张文倩 （浙江工业大学 药学院，浙江 杭州 ３１００１４） 摘要：基因表达及功能分析需要高通量的表达系统，因而简单、经济且高效地将 ＰＣＲ产物或其他来源的目的基因片段构 建到质粒载体中就成为了亟需解决的问题。传统克隆方法使用限制性内切酶和连接酶，其缺点是受到基因序列中原有的酶 切位点的限制以及依赖连接酶导致的较低的连接转化率。为了克服这些缺点，一些不需要限制酶和连接酶的克隆方法被开 发出来并运用到基因克隆中，获得了更佳的实验结果。该文就 、 克隆和 重组克隆这三种不依赖连接反应的 ＬＩＣＵＤＧ Ｇａｔｅｗａ ｙ 高通量克隆方法的原理及特性进行介绍。 关键词：不依赖连接克隆；Ｇａｔｅｗａ 重组克隆；ＵＤＧ克隆 ｙ 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｑ７８４ Ａ １００６８３７６２０１３０４００４３０４ 犕犲狋犺狅犱狊犳狅狉犎犻犺狋犺狉狅狌犺狌狋犆犾狅狀犻狀 狑犻狋犺狅狌狋犔犻犪狋犻狅狀犚犲犪犮狋犻狅狀 犵 犵狆 犵 犵  ， ， 犔犐犎狌犪犻狀 犔犐犖犆犺犲狀狊犺狌犻 犣犎犃犖犌犠犲狀犻犪狀 狇 狇 （ ， ， ， ， ） ＣｏｌｌｅｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ Ｚｈｅｉａｎ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏ Ｈａｎｚｈｏｕ３１００１４ Ｚｈｅｉａｎ Ｃｈｉｎａ ｇ ｊ ｇ ｙ ｇｙ ｇ ｊ ｇ ： ， 犃犫狊狋狉犪犮狋Ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｅｎｅｃｌｏｎｉｎ ａｎｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎ ｈｏｗｔｏ ｕｔＰＣＲ ｒｏｄｕｃｔｓｏｒｏｔｈｅｒｓｏｕｒｃｅｏｆｕｒ 　　 ｐ ｇ ｇ ｐ ｐ ｐ ｐ ， ｏｓｅ ｅｎｅｆｒａｍｅｎｔｉｎｔｏｔｈｅ ｌａｓｍｉｄｖｅｃｔｏｒｓｉｍ ｌ ｅｃｏｎｏｍｉｃａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｉｓａ ｒｏｂｌｅｍｆｏｒｅｏｌｅｔｏｓｏｌｖｅ．Ｔｈｅｄｉｓａｄ ｐ ｇ ｇ ｐ ｐｙ ｐ ｐ ｐ ｖａｎｔａｅｓｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｒａｃｔｉｃｅｓｕｓｉｎ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｍｅｓａｎｄｌｉａｓｅａｒｅｌｏｗｔｒａｎｓｌａｔｉｎ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎｂ ｌｉｍｉｔｏｆｒｅｓｔｒｉｃｔ ｇ ｐ ｇ ｙ ｇ ｇ ｙ