第一章 植物组织培养实验室的构建与操作技术PPT.ppt

２．无机盐类(inorganic element） 　　　离体组织生长发育的基本成分，根据植物对必需元素需要的量，可以分为： 大量元素 微量元素 大量元素 指植物所需元素的浓度大于0.5mmol／L的元素，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。 除C、H、O外，其它矿质元素通常以一定浓度的无机化合物形式，按一定比例配制而成，溶于水中以离子态被吸收 N有硝态氮KNO3和铵态氮(NH4)2SO4两种形式（一般NH4—N对植物生长较为有利）。 微量元素 浓度小于0.5mmol／L的元素，有 Fe、Cu、Zn等。 铁盐在合成叶绿素中起重要作用，缺铁影响到胚的发育，阻碍子叶变绿。 3.有机化合物(organic compound) [基本培养基（只含有大量和微量元素）] 　 为使培养物的生长更好，还需添加各种有机成分：糖类、维生素、醇类、嘌呤、氨基酸等 （１）糖类（碳水化合物 ） 　　碳源，维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使用蔗糖。 不同浓度会影响细胞的增殖分化，试管苗生长与繁殖浓度2-3%，幼胚培养4-6%，某些特殊培养中用8-10%。 细胞和原生质体培养还用麦芽糖、葡萄糖、果糖 （２）维生素 　　明显的促进离体培养物的生长。 盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆醇-VB6、烟酸、生物素、抗坏血酸-Vc等。 一般用量为0.1～1.0mg／L。 （３）肌醇（环己六醇） 　促进胚状体和芽的形成。用量一般50-100mg/L。 （５）氨基酸 　　　常用甘氨酸和多种氨基酸混合物（水解酪蛋白、水解乳蛋白） 用量在10-1000mg／L之间。 （营养丰富，极易引起污染，如在培养中无特别需要，以不用为宜。） （６） 天然复合物（包括部分蛋白质水解物） 　　　其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。 对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。 成分大多不清楚，一般尽量避免使用。 椰乳 使用最多、效果最大。用量为10%—20%（愈伤、细胞培养）。 香蕉汁 用量为150-200ml／L，缓冲pH值（兰花组培）。 马铃薯 用量为150—200g／L，缓冲pH值。 其他 酵母提取液、麦芽提取液、苹果和番茄的果汁等。遇热较稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。 ４、生长调节物质（植物激素） 植物激素（hormone）是植物新陈代谢中产生的天然化合物，能以极微小的量影响到植物的细胞分化、分裂、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠以及萌发等多种生理生化活动，是培养基的关键物质。 主要包括：生长素、细胞分裂素、赤霉素 生长素0.05-5mg／L 细胞分裂素0.05—10mg／L。 （１）生长素类(auxin) 生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，促进细胞脱分化，诱导根的分化和促进细胞伸长生长。 天然的生长素热稳定性差，高温高压或受光条件易被破坏。在植物体内也易受到体内酶的分解。组织培养中常用人工合成的生长素类物质 常用IAA、IBA、NAA、2,4-D 配成1mg/ml的溶液贮于冰箱中 IAA--天然生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，受光也易分解 NAA--启动能力比IAA高出3-4倍，可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，应用较普遍 IBA--促进发根能力较强 NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 2，4—D --启动能力比IAA高10倍，特别是促进愈伤组织的形成，同时强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应 腺嘌吟的衍生物，包括6-BA、Kt、Zt 等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。 作用： 诱导芽的分化 促进侧芽萌发生长 促进细胞分裂与扩大（茎增粗），抑制根的分化，延缓衰老 多用于诱导不定芽的分化、芽的增殖。 （２）细胞分裂素类(cytokinin，CTK) （３）赤霉素（gibberellic acid） 有20多种，培养基中添加的是GA3，一般极少使用 作用 促进幼苗茎的伸长生长 促进胚发育成小植株； 离体培养下，还与生长素协调作用对形成层分化有影响 当生长素／赤霉素比值高，木质部分化，比值低，韧皮部分化。 打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提前萌发。 在器官形成后，添加赤霉素有时可促进器官或胚状体的生长 激素配比模式 生长素/细胞分裂素的比值决定分化发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。