[医学]真核生物的转录和后加工.ppt

真核生物 RNA聚合酶 —— 三种RNA-pol I 、II、III 真核生物的转录过程 （一）转录起始 真核生物的转录起始上游区段比原核生物 多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结 合模板DNA，而是借助众多转录因子，其起始过程比原核生物复杂。 1. 转录起始前的上游区段 顺式作用元件(cis-acting element) 2. 转录因子 能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(trans-criptional factors, TF)。 参与RNA-pol Ⅱ转录的TFⅡ 3. 转录起始前复合物(pre-initiation complex, PIC) 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。 4. 拼板理论(piecing theory)  一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性和专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。 （二）转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。 转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。 （三）转录终止 帽子结构 （二）mRNA的剪接 1. hnRNA 和 snRNA 核内的初级mRNA称为杂化核RNA (hetero-nuclear RNA, hnRNA) snRNA (small nuclear RNA) 断裂基因(splite gene) 真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。 2. 外显子(exon)和内含子(intron)  外显子 在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列。 内含子 隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。 4. mRNA的剪接 —— 除去hnRNA中的内含子，将外显子连接。 snRNP与hnRNA结合成为并接体。 核酶研究的意义 核酶的发现，对中心法则作了重要补充； 核酶的发现是对传统酶学的挑战； 利用核酶的结构设计合成人工核酶 。 最简单的核酶二级结构——槌头状结构　　　 　　　　　　　(hammerhead structure) 底物部分 * 真核生物RNA聚合酶的特性 类别 I II III 细胞内位置 核仁 核质 核质 转录产物 除5S-rRNA外其余rRNA hnRNA tRNA snRNA 5S-RNA 占RNA转录总量 50-70% 20-40% 10% 对α-鹅膏蕈碱的敏感性 耐受 高度敏感 中等敏感 (物种特异性) 注：鹅膏覃碱是真核生物 RNA-pol 的特异性抑制剂 转录起始点 TATA盒 CAAT盒 GC盒 AATAAA 转录终止点 外显子 翻译起始点 内含子 OCT-1 OCT-1：ATTTGCAT八聚体 蛋白激酶，使CTD磷酸化 TFⅡH ATPase 57(?)，34(β) TFⅡE 解螺旋酶 30，74 TFⅡF 促进RNA-polⅡ结合 33 TFⅡB 稳定ⅡD-DNA复合物 12，19，35 TFⅡA 辅助TBP-DNA结合 TAF 结合TATA盒 TBP，38 TFⅡD 功能 亚基和(或)分子量（kDa） 转录因子 TBP TAF TF II H 转录延长中的核小体移位 RNA-Pol RNA-Pol RNA-Pol 核小体 转录方向 真核生物的转录后修饰 Post-transcriptional Modification 一、mRNA的转录后加工 (一)首尾的修饰 1. 5′-端加帽：m7GpppG—— 2. 3′-端加尾：多聚腺苷酸 (poly A) 帽子结构的生成 5? pppGp… 5? GpppGp… pppG PPi 鸟苷酸转移酶 5? m7GpppGp… 甲基转移酶 SAM 5? ppGp… 磷酸酶 Pi 帽子结构 核内的蛋白质 小分子核糖核酸蛋白体 （并接体, splicesome） snRNA 非编码区 A~G 编码区1~7 鸡卵清蛋白基因 hnRNA 首、尾修饰 hnRNA剪接 成熟的mRNA 鸡卵清蛋白基因及其转录、转录后修饰 3. 内含子的分类 I：主要存在于线粒体、叶绿体及某些低等真核生物的 rRNA基因； II：也发现于线粒体、叶