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生物膜Biomembrane 生物化学与分子生物学教研室 Department of Biochemistry Molecular Biology 燕 秋 膜的相关词 膜组学 膜生物化学与分子生物学 膜拓扑学 膜生物物理与生物工程 《生物膜》：中国科学院杨福愉院士 2005年， 科学出版社 研究范围和意义 以膜的结构功能为切入点，研究细胞基本生命活动（分裂、分化、凋亡、运动、衰老）规律；为正常生理和病理过程的膜相关的调控提供实验依据；为重大疾病（肿瘤、心脏病、免疫性疾病及衰老）的防治做出贡献。 二、生物膜结构 分泌蛋白进入内质网—信号肽假说 当肽链合成至约70个氨基酸残基时，信号肽识别颗粒（SRP）与信号肽、GTP及核蛋白体结合，形成核蛋白体-多肽-SRP复合体，使肽链合成暂停。 SRP引导该复合体识别并结合内质网（ER）上的SPR受体。 核蛋白体大亚基与ER上的核蛋白体受体结合，锚定在ER上。 具有GTP酶活性的SRP水解GTP并脱离复合体，肽链合成又开始进行。 信号肽引导后续肽链通过转位子复合物（ER上跨膜通道）进入ER腔，并被信号肽酶（位于ER膜腔面）切除而降解。 分子伴侣HSP70促进蛋白折叠成熟。 膜蛋白的拓扑学 （membrane protein topology） 膜蛋白在膜上的定位和分布、空间构象 ——蛋白质在膜上的整体取向。 疏水性原则-预测跨膜蛋白质序列 嗜水图 -hydropathy plot It is used to find clusters of hydrophobic amino acids, which could indicate that the polypeptide in question is a transmembrane protein. A transmembrane protein has hydrophilic parts which protrude out on either side of the cellular membrane, and a hydrophobic centre which lies within the membrane. 20种氨基酸从有机相转移到水相的自由能变化；统计某一氨基酸在所有已知蛋白中出现在疏水区的比例。 影响因素 信号肽、跨膜电位（内负）、负电磷脂（朝内） 局部膜结构——微区（microdomains） 膜脂和膜蛋白分子在细胞膜上的分布并不是均一的，它们可形成特殊的，排列有序并且相对稳定的局部膜结构——微区（microdomains）。脂筏（lipid rafts）和小凹（caveolae，也称为膜窖）。二者均富含鞘糖脂和胆固醇。 脂筏直径约70nm,因所含有的鞘糖脂长且饱和的脂肪酸链相对伸展而使局部细胞膜增厚。 小凹是电镜下可观察到的膜的囊状内陷，含有特异的结构蛋白-小凹蛋白(caveolin)。脂筏和小凹通过所聚集的多种GPI-连接糖蛋白、膜受体和信号分子等，参与了跨膜信号转导、胆固醇代谢调节和膜泡运输等多种细胞行为。 三、生物膜蛋白的分离纯化及鉴定 研究膜蛋白结构和功能的先决条件是获得纯的膜蛋白。 一、膜蛋白纯化中需要考虑的几个方面  (1) 抑制蛋白酶活性 大多数蛋白质的含量都很低，组织和细胞中处理过程中所释放出来的内源性蛋白酶的降解作用，会使待纯化的蛋白产物的质和量受到很大的影响。因此，必须尽可能地抑制蛋白酶的活性。 蛋白酶按其活性位点的功能基团可分为4大类：丝氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、金属蛋白酶和酸性蛋白酶；而蛋白酶抑制剂也相应的被分为四种： EDTA金属蛋白酶 PMSF（苯甲基磺酰氟）、亮抑肽酶丝氨酸蛋白酶和巯基蛋白酶 抑肽酶丝氨酸蛋白酶 没有一种蛋白酶抑制剂是全能的，根据样品的特点,组合应用的蛋白酶抑制剂。 （2） 低温操作 为保持蛋白质/酶的活性, 应尽可能在低温下进行, 并可降低内源性蛋白酶的活性。 （3）选择适当的去污剂 由于去垢剂(detergent)能破坏脂双分子层结构并取代与膜蛋白的跨膜区相接触的磷脂，故可以其用来溶解膜蛋白。 纯化膜蛋白的最关键的一步。去污剂不使膜蛋白变性失活。 常用的去垢剂有