组织病理学制片技术.pptVIP

（二）注意事项 活细胞标本制备中玻片的清洗：新玻片常有游离碱,因此应用清洗液或10%盐酸浸泡24h,然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min,再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中浸泡1h，然后擦干或烤干备用。一张良好的血片，要求厚薄适宜，头体尾分明，分布均匀，边缘整齐，两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色，以免细胞溶解和发生退行性变。 三、活细胞标本的制备 多用于科研，用于常规病理诊断的较少。标本主要来源于建株的培养细胞，短期培养细胞和外周血等。细胞可直接培养在盖玻片上，固定后即可进行染色观察或进行免疫组织化学染色或扫描电镜标本制备。也可培养于培养瓶或培养板内，制成细胞悬液，收集一定的细胞还可进行涂片。可以经离心后，进行透射电镜标本制备。 谢谢大家！ * * 脱落细胞学 检查 采集病变处脱落细胞固定、涂片染色后进行观察。如：子宫颈癌、食管癌、鼻咽癌—直接采集，肺癌—自然分泌物(痰) 7.图象分析技术 病理学形态观察的一种更为精确的定量标准和方法。主要应用于核形态参数的测定(如核直径、周长、面积、体积、形态因子等)。 也用于区别肿瘤的良恶性、区别癌前病变和癌、肿瘤的组织病理分级和判断预后等。 还可用于DNA倍体的测定和显色反应(如免疫组织化学)的定量等方面。 * * * * 3、组织化学和细胞化学的观察： 一般称为特殊染色，通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色试剂，显示病变组织细胞的化学成分(如蛋白质、核酸、脂类、糖类等)。 4、免疫组织化学观察： 利用抗原与抗体的特异性结合反应来检测组织中未知的抗原或抗体，借以判断肿瘤的组织来源与分化方向。 * 第二节 组织切片法(Tissue sectioning) 组织切片法包括石蜡切片法、冰冻切片法、火棉胶切片法、树脂包埋薄切片法和大组织石蜡切片法等。常用的切片工具包括组织切片机、切片刀和自动磨刀机等。 一、组织切片机和切片刀 1. 石蜡切片机 2. 火棉胶切片机 3. 恒冷箱切片机 4. 震动切片机 石蜡切片机 震动切片机 恒冷箱切片机 切片刀 切片刀是切片机的重要部件，常见的有两种： 一种为可重复使用的钢刀，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等，根据切片刀的形态，有平凹型、深平凹型、平楔型、双凹型。 另一种为一次性钢刀片，是一种薄型切片刀片，用于普通石蜡切片。使用时固定在特制的刀架上。 各种切片刀的剖面图 a平凹形 b深平凹形 c平楔形 d双凹形 石蜡切片机用一次性钢刀片 二、组织切片(Tissue sectioning) 石蜡切片仍是目前各种切片制作方法中最常用、最普遍的一种方法。 (一)切片前的准备 1. 备齐常用器具, 如玻片、毛笔和铅笔或刻字笔。 2. 检查切片机的工作状态, 将固件都拧紧，检查切片刀是否锋利, 切片刀质量是保证切片的关键。如果使用一次性刀片, 应根据切片情况及时调整刀刃位置。 3. 清洁玻片的方法 （1）新载玻片的处理： 先用清洁液浸泡12~24h, 流水充分冲洗后, 用蒸馏水洗3~5遍, 95%酒精浸泡2h, 用绸布擦干或用烘箱烤干备用。清洁液是用重铬酸钾和浓硫酸按比例配成的洗液。 常用的有以下几种配方： ①重铬酸钾(g):浓硫酸(ml):蒸馏水(ml)=1:1:10; ②重铬酸钾:浓硫酸:蒸馏水=2:3:25; ③重铬酸钾:浓硫酸:蒸馏水=2:5:15。 （2）盖玻片的处理：盖玻片可按以上方法处理，但因盖玻片很薄，以上处理程序应缩短。清洁液浸泡2h，流水冲洗。也可用以下方法清洗:盖玻片立排于卧式染缸(排2行，中间隔以载玻片)。松紧度以玻片可轻松转动为好，以下步骤应保持液体进入每个玻片间隙，玻片之间不能有气泡。用1%盐酸酒精浸泡2h，然后流水冲洗干净，再用蒸馏水冲洗数次。入95%酒精浸泡2~3h，无水酒精浸泡20min，倒掉酒精放60℃烘箱烤干备用。 （二）切片制作过程 1. 蜡块在冰箱中预冷，然后固定在切片机上。将切片刀装在刀架上。调整蜡块与刀的位置，使蜡块切面与刀刃接近。 2.切片机多为轮转式，使用时左手执毛笔，右手旋转切片机转轮。先修出标本，直到组织全部暴露于切面为止，标本过小时修块应多加注意，大标本要切全。切出蜡带后，用毛笔轻轻挑起一端，用镊子夹起另一端，正面向上放入展片水槽中(水温一般低于蜡熔点10~12℃)，待切片展平后，即可进行捞片。 3. 切片时刀是由下向上运动，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端(如皮肤组织的表皮部分，胃肠等组