[政史地]090730高三生物《血红蛋白的提取与分离2》课件.pptVIP

2）凝胶色谱柱填料的处理 计算凝胶量 配置凝胶悬浮液 装填 洗涤平衡 　　凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 注 意 　　缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。 注 意 装配好的凝胶柱 　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 思考 　　在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 　　使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。 思考 　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 思考 如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。 　　你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？ 思考 3）样品加入与洗脱 50cm高 3）样品加入与洗脱 ①缓冲液缓慢下降 50cm高 ②加透析样品 注意正确的加样操作： ①不要触及破坏凝胶面 ②贴壁加样 ③使吸管管口沿管壁环绕移动 注 意 3）样品加入与洗脱 ①缓冲液缓慢下降 50cm高 ③样品渗入凝胶床：④洗脱： ⑤收集： ②加透析样品 收集得到的纯化后的蛋白 AVSEQ08.DAT 　　1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？ 三 实验结果分析与评价 　　观察你处理的血液样品离心后是否分层？如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀，也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 　　1. 你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？ 三 实验结果分析与评价 　　2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 　　2. 你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 　　由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖—2000或红色葡聚糖，观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 　　3. 你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？ 湖南长郡卫星远程学校 2009年下学期 制作 03 　　用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 二 实验操作 　　用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 　　鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。 二 实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 1. 样品处理 样品处理——粗分离 ——纯化——纯度鉴定 二 实验操作 血液有哪些成分？ 血液 血浆 水分 其他物质 血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等 血细 胞 白细胞 血小板 红细胞 (最多) 血红蛋白 (90％) 两个α－肽链 两个β一肽链 四个亚铁血红素基团 血液有哪些成分？ 血红蛋白 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 ①目的：去除( ) ②方法： 　　( )离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的( )，将下层( )的红细胞液体倒入烧杯，再加入用( )的( ) 洗涤。 (1)红细胞的洗涤 杂质蛋白 ①目的：去除( ) ②方法：