生物主要工艺学 氨基酸类药物.ppt

第十二章 氨基酸类药物 第一节 氨基酸类药物得基本概念 氨基酸及其衍生物在医药中的应用 （一）氨基酸的营养价值及其与疾病治疗的关系 必需氨基酸—人和哺乳动物自身不能合成，需要由食物供应，称为必需氨基酸。赖氨酸，色氨酸，苯丙氨酸，蛋氨酸，苏氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，缬氨酸等8种。 （二）治疗消化道疾病的氨基酸及其衍生物 谷氨酸及其盐酸盐，谷氨酰胺，乙酰谷酰胺铝，甘氨酸及其铝盐，硫酸甘氨酸铁，维生素U及组氨酸盐酸盐等。 （三）治疗肝病的氨基酸及其衍生物 精氨酸盐酸盐，磷葡精氨酸，鸟天氨酸，谷氨酸钠，蛋氨酸，乙酰蛋氨酸，瓜氨酸，赖氨酸盐酸盐，及天冬氨酸等。 （四）治疗脑及神经系统疾病的氨基酸及其衍生物 谷氨酸钙盐及镁盐，氢溴酸谷氨酸，色氨酸，5－羟色氨酸、左旋多巴等。 （五）用于肿瘤治疗的氨基酸及其衍生物 偶氮丝氨酸，氯苯丙氨酸，磷天冬氨酸及重氮氧代正亮氨酸等。 （六）其它氨基酸类药物的临床应用 第二节 氨基酸类药物的生产方法 一、水解法 （一）基本原理 1.蛋白质水解方法 酸水解法、碱水解法、酶水解法 2.氨基酸分离方法 溶解度法、特殊试剂沉淀法、吸附法、离子交换法 3.氨基酸精制方法 结晶，重结晶 （二）用水解法 L－胱氨酸的制备： 二、发酵法 L－异亮氨酸的制备 工艺过程 1）菌种培养 种子培养基组成（％）为：葡萄糖2，尿素0.3，玉米浆2.5，豆饼水解液0.1，pH6.5。二级种子培养基加菜籽油，其余同一级种子培养基。 一级种子培养：1000ml三角烧瓶中培养基装量为200ml，接种一环牛肉膏斜面AS1.998菌种，摇床30℃16h。 二级种子培养：接种量3.5％，培养8h。逐级放大。 2）灭菌、发酵 发酵培养液组成（％）：硫酸铵4.5，豆饼水解液0.4，玉米浆2.0，碳酸钙4.5，pH7.2，淀粉水解还原糖粗糖浓度11.5。灭菌，接种1％菌种（v/v），搅拌，发酵。 3）除菌体，酸化 发酵结束后，发酵液加热至100℃并维持10min，冷却过滤，滤液加工业硫酸和草酸至pH3.5，过滤除沉淀。 4）离子交换、吸附分离 上述滤液每分钟以树脂量1.5％的流速进H＋型732离子交换柱（φ40 ×100cm), 以100L去离子水洗柱，再以60℃,0.5mol/L氨水按3L/min的流速进行洗脱。分部收集洗脱液。 5）浓缩赶氨 6）脱色、浓缩、中和 7）精制，烘干 三、酶法转化 天冬氨酸和丙氨酸的制备 工艺过程 1）菌种培养 大肠杆菌（E. coli） AS 1.881 的培养 斜面培养基为普通肉汁培养基 摇瓶培养基成分（％）：玉米浆7.5，反丁烯二酸2.0，硫酸镁（7水）0.02，氨水调pH6.0，煮沸后过滤，500ml三角烧瓶中装液量50-100ml。从新鲜斜面上或液体中培养种子，接种子于摇瓶培养基中，37℃振摇培养24h，逐级扩大培养至1000～2000ml规模。培养结束后用1mol/L HCl调pH5.0，升温至45℃并保温1h，冷却至室温，离心收集菌体。 德阿昆哈假单胞（Pseudomonas dacunhae）68变异株的培养 斜面培养基组成（％）为蛋白胨0.25，牛肉膏0.52，酵母膏0.25，NaCl0.5，pH7.0，琼脂2.0。种子培养基与斜面培养基，不加琼脂，250ml三角烧瓶中培养基装量40ml。摇瓶培养基组成（％）为L－谷氨酸3.0，蛋白胨，酪蛋白水解液0.5，磷酸二氢钾0.05，MgSO4.7H2O 0.01，用氨水调pH7.2，500ml三角烧瓶中培养基装量为80ml。将培养24h的新鲜斜面菌种接种于种子培养基中，30℃振摇培养8h，再接种于摇瓶培养基中， 30℃振摇培养24h，逐级放大。 2）细胞固定化 E coli的细胞固定化 取湿菌体20kg，悬浮于生理盐水中，保温至40℃，再加入90L保温至40℃的12％明胶溶液及10L1.0％戊二醛溶液，充分搅拌均匀，放置冷却凝固，再浸入0.25％戊二醛溶液中。于5℃过夜后，切成3～5mm的立体小方块，浸入0.25％戊二醛溶液5℃过夜，蒸馏水充分洗涤，滤干得含天冬氨酸酶得固定化。 假单胞菌体固定 取湿菌体20kg，加生理盐水搅拌至稀释至40L，另取溶于生理盐水的5％角叉菜胶溶液85L，两液均保温至45℃后混合，冷却至5℃成胶。浸于600L2％KCl和0.2mol/L已二胺的0.5mol/L pH7.0的磷酸缓冲液中，5℃下搅拌10min，加戊二醛至0.6mol/L浓度， 5℃搅拌30min，取出切成3～5mm的立体方块，用2％KCl溶液充分洗涤后，滤去洗涤液，即得固定化脱羧细胞。 3）生物反应堆的制备 4）转化反应 5）产品纯化与精制 四、化学合成法 L－脯氨酸 第三节 氨基酸输液 * α氨基酸 人发或猪毛 水解液 L