[农学]分子生物学课件第11讲.ppt

第四章 以修复作用为中心的DNA的安全保障体系 导致DNA不稳定的因素 1，偶然的复制错误 2，环境紫外线、电离辐射化学物质（突变剂）造成的核酸分子损伤 3，外源遗传物质的侵入 保证DNA稳定性的机制 1，复制修复系统 2，损伤修复系统 3，限制-修复系统 第一节 复制修复 一、尿嘧啶糖基酶系统 （一）DNA中尿嘧啶的产生 （二）尿嘧啶糖基酶系统的组成 （三）修复过程 二、错配修复系统（mismatch repair system） （一）错配修复系统的组成 （二）错配修复的过程 1，错配矫正酶与未甲基化的GATC及同一条链上的错配碱基结合 2，错配矫正酶在两者之间切除一段包括错配碱基的DNA单链 3，DNA聚合酶III进行缺口充填 4，DNA连接酶连接切刻 （三）错配修复系统其他作用 1，去除渗入DNA的碱基类似物 2，在基因转换中起重要作用 第二节 损伤修复 致损伤因素 DNA分子损伤的类型 一、胸腺嘧啶二聚体的产生及其后果 二、胸腺嘧啶二聚体修复的生物学指征 （一）细菌的活存曲线 （二）修复类型 1，光复活（photoreactivation） 2，暗修复 除了可作用于胸腺嘧啶二聚体外，还可以修复其他类型的损伤，包括： （1）切除修复 （2）重组修复 （3）SOS修复 （4）二聚体糖基酶修复 三、胸腺嘧啶二聚体修复的分子生物学机制 (一）光复活（photoreactivation） 1，光复活的定义 2，光复活的过 （二）切除修复 1，切除修复一般过程 2，大肠杆菌的切除修复 （1）修复过程 （2）大肠杆菌切除修复的类型 短补丁修复（short-patch repair） 长补丁修复（long-patch repair） 3，真核生物的切除修复 （三）重组修复 1，除Uvr系统之外，还存在其他的暗修复系统 2，重组修复（复制后修复）的机制 （1）重组修复的姐妹链交换假说（图4-10） （2）重组修复所涉及的基因 （四）SOS修复 1,SOS反应 2,SOS修复的概念 3,SOS修复的结果 4,RecA蛋白在SOS修复中的作用 (1)RecA蛋白的主要生化活性 (2) RecA蛋白的作用 5,LexA蛋白在在SOS修复中的作用 (1)LexA蛋白的作用 (2)由LexA控制的SOS基因构成一个调控元 din(damage inducible genes)基因,或SOS基因 SOS框 （五）嘧啶二聚体糖基酶修复系统 四、其他损伤类型及其修复 （一）非标准碱基的修复 1，非标准碱基及其相应的DNA糖基酶 2， DNA糖基酶的修复机制 （二）碱基的丢失 1，去嘌呤作用（depurination） 2，无碱基内切酶的作用 3，碱基插入酶 （三）烷基化损伤的修复 1，烷基化的主要位点 2，Ada蛋白在烷基化损伤的修复中的作用 （1）ada基因产物 （2）Ada蛋白的自杀行为 3，E.coli对烷基化的适应性反应 （1） Ada蛋白的作用 （2）alkA基因的作用 （3）alkB的作用 （四）链的断裂 1，造成DNA链断裂的因素 2，修复方式 （1）单链断裂修复 （2）双链断裂修复 （五）交联 1，致交联因素 2，交联种类 3，修复方式 （六）真核生物的修复系统 1，酵母 2，哺乳动物 3，真核生物蛋白质的多聚ADP核糖基化与DNA修复的关系 （1）真核生物蛋白质的多聚ADP核糖基化（ADP-ribosylation） （2）多聚ADP核糖基化的可能作用 观点一 观点二 第三节 限制与修饰（restriction and modification） 一、限制-修饰现象 1，大肠杆菌?噬菌体的限制和修饰模式 2，大肠杆菌的限制-修饰系统 （1）限制-修饰作用 3，居民DNA 二、限制-修饰系统的分类 （一）细菌中三种不同类型的修饰-限制酶 （二）II类修饰-限制酶 1，酶分子的构成 2，识别位点 3，切割位点 4，对底物的作用 5，酶切位点 （三）I类酶 1，酶分子的构成 （1）三个亚基： （2）两种功能 （3）基因突变和万一保安机制 2，I类酶的作用位点 （1）EcoB和EcoK的识别位点EcoB的识别序列 （2） EcoB和EcoK的甲基化位点 （3） I类酶的切割位点 3， I类酶的限制-修饰机制 （1）M亚基首先与辅助因子S-腺苷甲硫氨酸（SAM）结合，酶分子变构处于活化状态 （2）酶-SAM与DNA结合后，在ATP的参与下，对不同甲基化程度的底物产生不同的限制-修饰作用 4， I类酶识别切割位点的机制 （1）酶移动假说 （2）DNA移动假说 （四）III类酶 1，酶的组成及功能 2，识别和修饰位点 3，限制位点 三、限制-修饰系统的生物学意义 1，保护自身的DNA的稳定性不受外来DNA的影响 2，可能还有其他功能 （1）I类