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2.液-固吸附分离固定相 种类：硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。种类有限，应用面相对较窄。 结构类型：全多孔型和薄壳型； 粒度：5～10 μm。 3.离子交换色谱分离固定相 结构类别： （1）薄壳型离子交换树脂 薄壳玻璃珠为担体，表面涂约1%的离子交换树脂。 （2）离子交换键合固定相 薄壳键合型；微粒硅胶键合型（键合离子交换基团）。 树脂类别： （1）阳离子交换树脂（强酸性、弱酸性）。 （2）阴离子交换树脂（强碱性、弱碱性）。 4. 空间排阻分离固定相 （1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多孔网状结构。 水为流动相。适用于常压排阻分离。 （2）半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚物，有机凝胶。 非极性有机溶剂为流动相，不能用丙酮、乙醇等极性溶剂 （3）硬质凝胶 多孔硅胶、多孔玻珠等； 化学稳定性，热稳定性好，机械强度大，流动相性质影响小，可在较高流速下使用。 可控孔径玻璃微球，具有恒定孔径和窄粒度分布。 3-5高效液相色谱法流动相 LC中：固定相选定，流动相的种类、配比，显著影响分离效果，因此流动相的选择很重要。 一、在选择流动相时应注意下列几个因素： 1.流动相的纯度 一般用AR级试剂，必要时进一步纯化除去杂质。溶剂不纯，长期使用中因杂质积累导致监测器噪音增大，也影响馏分纯度； 2.避免用引起柱效损失或保留特性变化的溶剂； 3.对试样要有适宜的溶解度； 4.溶剂的粘度小些为好； 5.应与检测器相匹配； 二、选用溶剂时，溶剂的极性为重要的依据。 采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。 也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。 常用的溶剂极性顺序如下： 水＞甲酰胺＞乙腈＞甲醇＞乙醇＞丙醇＞丙酮＞二氧六环＞四氢呋喃＞甲乙酮＞正丁烷＞醋酸乙醇＞乙醚＞异丙醚＞二氯甲烷＞氯仿＞溴乙烷＞苯＞氯丙烷＞甲苯＞四氯化碳＞二硫化碳＞环乙烷＞乙烷＞庚烷＞煤油（极性最小）。 *获得合适的溶剂强度（极性）:二元或多元组合的溶剂系统作为流动相。 *根据溶剂的作用，分为:底剂及洗脱剂。 *底剂决定基本的色谱分离情况； *洗脱剂起调节试样组分的滞留并对某几个组分具有选择性的分离作用。 *洗脱剂的组合选择直接影响分离效率。 正相色谱：底剂用低极性溶剂如正己烷、苯、氯仿等；而洗脱剂则根据试样的性质选取极性较强的针对性溶剂如醚、酯、酮和酸等。 反相色谱：以水为流动相的主体，加入不同配比的有机溶剂作调节剂。常用的溶剂是甲苯、乙腈、二氧六环、四氢呋喃等。 离子交换色谱：分析在含水介质中进行。组分的保留值可用流动相中盐的浓度（或离子强度）和pH来控制，增加盐的浓度导致保留值降低。对阳离子交换柱，流动相pH值增加使保留值降低；而阴离子交换柱中，情况相反。 排阻色谱法：溶剂必须与凝胶本身非常相似，这样才能润湿凝胶并防止吸附作用。用软质凝胶时，溶剂必须能够溶胀凝胶。溶剂黏度是重要的，高黏度将限制扩散作用损害分辨率。对高分子有机物，溶剂多为：四氢呋喃、甲苯、间甲苯酚、N,N-二甲基甲酰胺等；生物物质分离主要用水、缓冲盐溶液/乙醇、丙酮等。 3-6 高效液相色谱分离选择与应用实例 一、高效液相色谱分离选择 用HPLC对试样进行分离，分析方法的选择，应考虑各种因素：试样性质（相对分子质量、化学结构、极性、溶解度参数等化学性质和物理性质）；LC分离类型的特点及应用范围，实验室条件（仪器、色谱柱等）。 液相色谱分离类型选择参考表所示 二、HPLC的应用 1. 环境中有机氯农药残留量分析 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：示差折光检测器 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 3. 血浆分析 4.食品中三聚氰胺的检测-反相离子对色谱分析 色谱柱: D IKMA C18 ( 250mm ×416mm,5μm) 流动相:乙腈∶离子对试剂溶液( 2.02g庚烷磺酸钠和2.10g柠檬酸定容至1000mL ) = 8 ∶92( v/ v) 流速:112m