[医学]第02章 核酸的结构与功能.ppt

第二章核酸的结构与功能 Structure and Function of Nucleic Acid DNA中含有A、G、C、T RNA中含有A、G、C、U 碱基的互变异构体 3．核苷(nucleoside)： 核苷是由戊糖与含氮碱基经脱水缩合而生成的化合物。 在大多数情况下，核苷是由核糖或脱氧核糖的C1′与嘧啶碱N1或嘌呤碱N9进行缩合反应，故生成的化学键称为N-糖苷键。 5?-核苷酸又可按其在5?位缩合的磷酸基的多少，分为一磷酸核苷（核苷酸）、二磷酸核苷和三磷酸核苷。 核苷酸的命名及缩写符号 3,5-磷酸二酯键的形成 定义 构成核酸的核苷酸或脱氧核苷酸从5′-末端到3′-末端的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 1951年由Franklin和Wilkins等人完成的研究工作，发现了DNA晶体的X线衍射图谱中存在两种周期性反射，并证明DNA是一种螺旋构象。 （二） DNA双螺旋结构模型要点 DNA是反向平行、右手螺旋的双链结构 DNA双链之间形成了互补碱基对 疏水作用力和氢键共同维系着DNA双螺旋结构的稳定。 双螺旋结构的表面形成了一个大沟(major groove)和一个小沟(minor groove)。 mRNA在真核生物中的初级产物称为hnRNA。 不均一核RNA(hnRNA)含有内含子(intron)和外显子(exon)。 外显子是氨基酸的编码序列，而内含子是非编码序列。 hnRNA经过剪切后成为成熟的mRNA。 tRNA的二级结构由于局部双螺旋的形成而呈现“三叶草”形，故称为“三叶草”结构。 tRNA的“三叶草”形结构包括：氨基酸臂、DHU臂、反密码臂、可变臂和TψC臂五部分。 原核生物中，rRNA有三种：5S，16S，23S。其中，16S的rRNA参与构成核蛋白体的小亚基，而5S和23S的rRNA参与构成核蛋白体大亚基。 真核生物中，rRNA有四种：5S，5.8S，18S，28S。其中，18S的rRNA参与构成核蛋白体小亚基，其余的rRNA参与构成核蛋白体大亚基。 snmRNAs的功能 （1）参与hnRNA和rRNA的加工和转运。 （2）参与基因表达过程的调控。 （3）催化性小RNA具有催化特定RNA降解的活性，称为核酶。 （4）siRNA可与外源基因表达的mRNA结合，诱导其降解。 核酸的酸碱及溶解度性质 核酸为多元酸，具有较强的酸性。 核酸的高分子性质 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA 沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降的速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。 ① 增色效应(hyperchromic effect)：指DNA变性后对260nm紫外光的光吸收度增加的现象； ② 旋光性下降； ③ 粘度降低； ④ 生物学功能丧失或改变。 DNA-DNA杂交示意图 DNA-RNA杂交示意图 第五节 核酸酶 Nuclease 核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。 一、核酸分子具有强烈的紫外吸收 碱基的紫外吸收光谱 DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA变性是双链解离为单链的过程 在理化因素会导致DNA双链互补碱基对之间的氢键发生断裂，使双链DNA解离为单链，这种现象称为DNA的变性(denaturation)。 定义 引起DNA变性的因素主要有：①高温，②强酸强碱，③有机溶剂等。 部分变性DNA的电镜图像 DNA变性后的性质改变： RNA的种类、分布、功能 信使 RNA 转运 RNA 核内不均一 RNA 核内小 RNA 胞浆小 RNA 细胞核和胞液 线粒体 功 能 mRNA tRNA mt mRNA mt tRNA HnRNA SnRNA SnoRNA scRNA/7SL - RNA 蛋白质合成模板 转运氨基酸 成熟 mRNA 的前体 参与 hnRNA 的剪接、转运 rRNA 的加工、修饰 蛋白质内质网定位合成 的信号识别体的组分 核仁小 RNA 信使 RNA 转运 RNA 核内不均一 RNA 核内小 RNA 胞浆小 RNA 细胞核和胞液 线粒体 功 能 mRNA tRNA mt mRNA mt tRNA HnRNA SnRNA SnoRNA scRNA/7SL - RNA