[生物学]凝集反应、沉淀反应.ppt

　　第五章　　凝集反应 颗粒性抗原与特异性抗原结合后，在适当的电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。 可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合形成致敏颗粒后，与相应的抗原或抗体结合，也能发生凝集反应。 　　　　第一节　凝集反应的特点 凝集反应的发生分为两个阶段：1、抗原抗体的特异性结合阶段；2、出现肉眼可见的凝集现象。 颗粒性抗原在悬液中带负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子，构成一个双层电子云。在松散层内界和外界间的电位差形成Z电位。溶液中负离子强度越大，Z电位也越大，Z电位使颗粒间互相排斥。 当抗原与相应抗体结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒相互靠拢，聚集在一起。 当抗体的分子太少或分子量小，不能克服相当厚度的离子云层时，则不能使颗粒聚集。在凝集反应中IgM的作用远大于IgG。 为促使凝集现象的出现，可采取以下措施：1、增加蛋白质和电解质，缩短颗粒间的距离；2、增加溶液的黏稠度；3、用胰酶和神经氨酸酶处理；4：以离心的方式克服颗粒间的排斥力。 定性检测：以凝集现象的出现与否来判别结果的阴阳性； 半定量试验：将抗体标本对倍稀释后检测，出现阳性的最高稀释度为待测抗体的效价和滴度。 在免疫学技术中，根据参与反应的颗粒不同，分为直接凝集反应和间接凝集反应。 自身红细胞凝集反应和抗球蛋白参与的凝集试验是两种特殊的凝集试验。 第二节 直接凝集反应 （direct agglutination test) 一、玻片凝集试验 在玻片上颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。 定性试验，简便、快速，灵敏度低。此法在临床上常用于分离培养阳性的细菌鉴定、ABO血型鉴定等。 二、试管凝集试验 半定量试验。 在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，出现肉眼可见的凝集现象。 多用于测定抗体效价，出现明显凝集的最高稀释度为待测血清抗体的效价和滴度。 为避免应反应条件不适当（如pH、电解质、 温度等）引起的假阳性或假阴性结果，试验 中必需设置阴性和阳性对照。 Weil-Felix reaction、Widal reaction 。 第三节 间接凝集反应 将可溶性抗原或抗体预先吸附或偶联在与免疫无关的大小合适的颗粒上，与相应抗体或抗原作用，在适当电解质参与下，出现特异性凝集现象称为间接凝集反应。 一、间接凝集反应的类型： 1、正向间接凝集试验：用抗原致敏载体检测相应抗体； 2、反向间接凝集试验：用抗体致敏载体检测相应抗原； 3、间接凝集抑制试验： (1)正向间接凝集抑制试验： 诊断试剂：抗原致敏的颗粒载体、相应的抗体；目的检测物：与致敏抗原相同的抗原。 检测过程：标本＋抗体→抗原致敏的颗粒→阳性（不凝集）；阴性（凝集）。 (2)反向间接凝集抑制试验： 诊断试剂：抗体致敏的颗粒载体、相应的抗原； 目的检测物：与致敏抗体相同的抗体。 检测过程：标本＋抗原→抗体致敏的颗粒→阳性（不凝集）；阴性（凝集）。 4、协同凝集反应 也是反向间接凝集试验，只是所用载体为金黄色葡萄球菌。 金黄色葡萄球菌的细胞壁含A蛋白，可以和IgG的Fc段结合，而两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍然保持正常的抗体活性。利用这种特性可以将特异性IgG结合在菌体上，形成致敏颗粒，与特异性抗原相遇时，能出现特异的凝集现象。 二、间接血凝试验 以红细胞为载体的间接凝集试验。 将可溶性抗原(或抗体）吸附人的“O”型血红细胞或绵羊或家兔的红细胞，制成致敏血红细胞，与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质参与下，出现红细胞凝集现象。 间接血凝试验操作简便，价格低廉，不需要特殊设备，结果也比较稳定。但其灵敏度比不上标记免疫，需要手工操作。 三、乳胶凝集试验 以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验。 胶乳颗粒的均一性、稳定性好于红细胞。 与蛋白质的结合能力及凝集能力不如红细胞。 灵敏度不如血凝实验。 白色乳胶凝集时反差不大。 彩色乳胶实验，提高灵敏度。 四、明胶凝集试验 以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验。 乳胶凝集试验与明胶凝集试验都已逐渐被淘汰。 第四节 自身红细胞凝集试验 反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞。主要试剂材料为抗人O型红细胞的单克隆抗体，这种抗体能与各种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应。这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体可用于检测标本中的抗原；如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体。反应中的标本为受检者的全血。 检测标本为全血，检测速度快。 灵敏度低，不能用于HIV抗体和HBsAg检测。 第五节　　抗球蛋白试验