[畜牧兽医]胚胎植入的调节及其体外模型的构建.pdf

配一806918 胚胎植入的调节及其体外 模型的构建 研究生 雷霆 导师 杨在清教授 Hans—Werner Denker教授 专业 生物化学与分子生物学 研究方向 胚胎植入的调节机制 学位级别 博士 华中农业大学生命科学与技术学院 中国武汉430070 2004年11月 图表目录 图1．国植入期和植入后魏小鼠胚胎发生模式图………………““………”．7 图2．人和小鼠胚源性干细胞系的建立和分化潜能的比较一……．．．…………’12 图3．小鼠胚胎干细胞(Es)和滋养层干细胞(Ts)的区别和关联…………．．．“14 图4．白血病抑制因子(L1F)及其受体(LIFR)在家兔早期胚胎中的表达……”28 图5．白血病抑制因子(LIF)在家兔子富内膜上皮组织中的表达……m．．．…”30 图6．白血病抑制因子受体(LIFR)在家兔子宫内膜上皮组织中的表达………·3l 图7，小鼠胎盘的结构……………………………………………．--………·…36 图8．小鼠滋养层细胞的谱系分化……………………………………………··37 图9．侵润性分析装置示意图…………………--．…………………………··45 图lO，分化和未分化的TS细胞的形态学差异………………………………··46 图11．标记基因在TS细胞分化过程中的表达……………………．．．…………48 图12．h-S细胞侵滑能力与分化的关系…………………………………………49 圈13，侵润性细胞的标记基因表达……………·……………………………“50 图14．鼠胚成纤维细胞条件培养基和FGF．4对TS细胞培养形态的影响……”52 图15．鼠胚成纤维细胞条件培养基和FGF-4对TS细胞分化标记基因的调控·53 圈16，鼠胚成纤维细胞条件培养基和FGF．4对TS细胞侵润能力的调节…55 图17．不同类型的条件培养基对Ts细胞侵润能力的调节 ¨56 图18．无蛋白鼠胚成纤维细胞条件培养基对TS细胞侵润能力的调节………·58 图19．蛋白酶介导的滋养层细胞与其周边环境的互作………．．．……………-·67 图20．在Matrigel上培养的Ts细胞的形态………………………．．．一………71 图21．TS细胞对Matrigel的侵润…………………?………………．．．．．．………72 图22．Matrigel对TS细胞分化的调节…………………………………………·73 图23．不同培养条件对TS细胞中基质金属蛋白酶(MMP)表达的调控……一·74 表2．TS细胞分化标记基因的PCR引物 表3．MMP和TIMP的PCR引物…．．．……．．．………………………．．．………“69 Vl 摘 要 论文分为两大部份：第一部分(第三章)讨论了细胞因子对早期胚胎发育和植 入的作用机制；第二部分(第四章和第五章)研究了细胞外基质对滋养层分化 和侵润能力的调节作用。相应的，摘要也分为了两部分。 factor，LIF)是一种与胚胎植入 摘要I：白血病抑制因子(1eukemiainhibitory 密切相关的细胞因子。本试验利用逆转录聚合酶链式反应(．RT-PCR)对家兔植 入前期胚胎中LIF及其受体(LIF receptor,LIFR)基因的转录模式进行检测， 析。结果显示，LIFR在桑椹期和胚泡期胚胎中均有表达，而LIFmRNA仅在胚 泡期出现，这表明胚源性LIF可通过自分泌来调节胚泡的形成。家兔子宫内膜 LIF和LIFR的表达量在植入前期逐步