[高二理化生]【高中生物选修】12 基因工程的基本操作程序.pptVIP

三、目的基因导入受体细胞 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 ③过程： 1、目的基因导入植物细胞的方法 （2）基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞 ①操作方法：利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 ② 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物 1、目的基因导入植物细胞的方法 （3）花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞 ①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ② 特点:十分简便经济。 ③例：转基因抗虫棉 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ①程序 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射 受精卵 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 ①微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 ②常用菌：大肠杆菌 ③常用法：Ca2+处理获得感受态细胞 ④过程： Ca2+处理 大肠杆菌 感受态 细胞 感受态细胞 吸收DNA 表达载体 与感受态 细胞混合 小结：将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 Ca2+处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 四、目的基因的检测与鉴定 导入过程完成后，全部受体细胞都能摄 入重组DNA分子吗？ 1 真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。 2 目的基因进入受体细胞后，是否都能稳定维持和表达？ 不一定，需要检测 1、鉴定——分子水平的鉴定 转基因生 物的DNA 探针 15N 15N 14N 14N （1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了 目的基因 基因探针： 放射性同位素等标记的DNA分子 方法—— DNA分子杂交技术 变性 变性 1、鉴定——分子水平的鉴定 变性 方法—— 分子杂交技术 （2）检测目的基因是否转录出了mRNA 探针 15N 15N 转基因生物 的mRNA 14N 14N 1、鉴定——分子水平的鉴定 提取 （3）检测目的基因是否翻译成蛋白质 方法——抗原-抗体杂交 苏云金杆菌 Bt毒素蛋白 将Bt毒蛋白注射小鼠体内 从小鼠血管抽出血液分离出抗Bt毒素的抗体 抗体 蛋白质 出现杂交带 脱分化 组织培养 2、鉴定——个体水平的鉴定 抗虫、抗病接种实验，活性比较实验 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 思考？ 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。 受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？ 课堂练习 1、有关基因工程的叙述中，错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 课堂练习 2、下列属于获取目的基因的方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥ D 课堂练习 3、有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 D 【拓展深化】　 工具酶只有两种：限制酶在操作程序1、2中用到且要求用同一种，目的是产生相同的黏性末端；DNA连接酶只在操作程序2中用到。 课堂练习 4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的