[高等教育]第2章1 工业微生物菌种的选育及扩大培养.pptVIP

第2章 工业微生物菌种的选育及扩大培养 生命科学学院 2011.2 2.1 工业微生物菌种 工业发酵对微生物菌种的要求 工业微生物常用菌种 2.1.1 工业发酵对微生物菌种的要求 高产 生长快 原材料适宜 培养条件易控制 副产物少 遗传稳定 非病原菌 2.1.2 工业微生物常用菌种 细菌 放线菌 酵母菌 霉菌 其他 2.2 工业微生物菌种的分离和选育 工业微生物菌种的分离与筛选 工业微生物菌种的选育 2.2.1工业微生物菌种的分离与筛选 工业微生物菌种分离筛选的基本步骤: 采样、富集培养、筛选和产物分析。 ⑴ 采 样 分离特定的微生物必须考虑: A.目的菌株特性、微生物的分布概况等。如土壤是微生物聚集最丰富的场所，因土壤组成、有机物浓度、pH等条件的不同，微生物的种群分布会非常不同。 ⑴ 采 样 ⑵ 富集培养 ⑵ 富集培养 增殖培养具体措施 控制培养基成分 某一特定物质为唯一碳源或氮源 控制培养的理化条件 根据目的微生物的特殊要求进行控制培养 抑制其他微生物的生长 高温、高压或加抗生素 ⑵ 富集培养 降解对羟基苯甲酸微生物的分离 ⑶ 分离培养 ⑶ 分离培养 要点：制备单孢子悬浮液、适当稀释、选择培养基上分离 培养条件对筛选结果影响也很大，可通过控制营养成分、pH、抑制剂、温度和通气及热处理等来提高筛选效率。 分离方法 固体培养基四区划法接种法 分离方法 利用选择平板进行直接分离 利用选择平板进行直接分离 ⑷ 目的微生物的筛选 ⑷ 目的微生物的筛选 ⑷ 目的微生物的筛选 摇瓶筛选：通过摇瓶发酵，考察比较各分离或初筛菌株的发酵能力而进行的筛选方法。摇瓶接近实际生产的发酵罐发酵，结果相对准确，更令人满意，但工作量大。 ⑷ 目的微生物的筛选 高通量筛选（hing throughput screening, HTS）：以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微孔板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行实验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机对实验室有选举数据进行分析处理，同一时间对数以万计样品检测。 试验内容 试验方法 复筛：初筛的菌株再次摇瓶培养，用精确的化学分析方法测定发酵液中的目的产物水平，进行比较，最后从中选出较为优质可靠的菌株2-3株，即复筛。 *微生物工程 College of Life Science * College of Life Science 酿酒酵母 — 喜糖及酸性环境—果园 注意 :采样一般是混合菌,不是纯种 蛋白酶产生菌 —环境中蛋白质丰富—屠宰厂 纤维素酶产生菌 — 以纤维素为碳源—朽木场所 B.遵循的原则是材料的来源越广泛,越有可能获得新的菌种。特别是在一些极端环境中，如高温、高压、高盐、高pH、低pH以及海洋中，存在着大量适应了各种环境压力的微生物类群。 C.采样后一般应尽快分离。 D.样本的预处理: 在分离之前，含微生物材料的标本首先进行预处理，可大大提高菌种分离的效率。 样品含所需菌种较多，可直接分离; 样品含所需菌种很少，就要设法增加数量(增殖或富集培养)。 增殖培养: 就是给混合菌群提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件以促使所需菌株大量繁殖，从而有利于分离它们。 往往几种措施并用 例如： 酒精酵母—含糖、酒精、低pH 纤维素酶产生菌—纤维素唯一碳源 放线菌—添加10%酚数滴(抑制霉菌和细菌) ......................... 富集培养是生物学家最强有力技术手段之一。 营养和条件无穷尽的组合可从自然界分离大量的特定微生物。 将土壤样品接种到含有对羟基苯甲酸的液体富集培养基中 A.增殖培养还不能得到微生物的纯种，生产菌在自然条件下通常是与各种菌混杂在一起的，所以有必要进行分离纯化，才能获得纯种。 B.要分离纯化获得纯种,必须将培养物制备成单孢子或单细胞悬浮液,经适当稀释后在琼脂平板上进行划线或稀释分离才能得到纯种。 划线法 单细胞微生物(细菌、酵母菌) 是将含菌样品在固体培养基表面作有规则的划线(有扇形划线法、方格划线法及平行划线法等)，菌样经过多次从点到线的稀释，最后经培养得到单菌落。划线法简单且较快。 A B C D A A B A B C 稀释法 是通过不断地稀释使被分离的样品分散到最低限度，然后吸取一定量注入平板，使每一微生物都远离其他微生物而单独生长成为菌落，从而得到纯种。稀释法在培养基上分离的菌落单一均匀，获得纯种的机率大，特别适宜于分离具有蔓延性的微生物。