类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染THP-1细胞模型-第三军医大学学报.DOCVIP

类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染THP-1细胞模型 的评价及其感染机制的初步探讨 黎元莉* 方瑶2* 毛旭虎2 陈海2 1：海南省三亚市人民医院检验科 2、重庆市第三军医大学临床微生物学教研室 摘 要：目的 建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pseudomallei,B. pseudomallei, BP for short)感染人急性单核白血病细胞THP-1的细胞模型，探讨聚乙二醇3350（PEG 3350）对细菌侵入细胞及胞内生存的影响，对比类鼻疽伯克霍尔德氏菌与其减毒株（也称为泰国株，即Burkholderia thailandensis,B. thailandensis，BT for short）的感染特性，为进一步阐明类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染机制奠定基础。 方法 通过绘制细菌生长曲线，探讨类鼻疽伯克霍尔德氏菌及其减毒株的增殖规律；通过透射电镜观察细菌胞内感染状态和宿主细胞的超微病理变化；分析不同时相的细菌入胞率和胞内生存状态，探讨细菌与宿主细胞的相互作用；通过检测受感染细胞培养液的上清和病人血清中的细胞因子，评价宿主细胞的反应性和PEG对于细菌侵入细胞及胞内生存的影响，以及对比细胞受类鼻疽伯克霍尔德氏菌及其减毒株感染后的炎症反应性，从而评价该模型的稳定性。结果 确定了B.pseudomallei和B.thailandensis的生长规律和感染时相特征及超微病理损伤特点。炎症因子测定中，两种细菌感染细胞后分泌的TNF-α出现感染中期的高峰，受BP感染的细胞的IL-6分泌则呈双峰改变,受BT感染的细胞IL-6的分泌和PEG对细胞分泌炎症因子的影响更为复杂。同时，病人血清中细胞因子的检测则没有显示出一定的规律，与其临床转归关系也不明确。结论 本试验成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染THP-1细胞的模型，初步探讨了类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染宿主细胞的机制，为进一步研究该病原菌与宿主细胞的相互作用提供了前提条件。 关键词：类鼻疽伯克霍尔德氏菌；类鼻疽伯克霍尔德氏菌减毒株；人急性单核白血病细胞；聚乙二醇 Evaluation of a Burkholderia pseudomallei invaded THP-1 cell model and analysis of inflammation reaction after infection Liyuanli Fangyao Chenhai Maoxuhu Abstract: Objective To establish a THP-1 cell infection model by burkholderia pseudomallei in vitro for further study on its pathogenesis. Methods：To establish the growth curve of B.pseudomalleiand and B.thailandensis,Find out the regularity of the two bacterial to decide the best methods in infection of THP-1; The number of intracellular bacteria and the morphological changes of the host cells were visualized by transmission electron microscope. Plate count for bacterial colonies in difference hours after invasion to analyses the intracellular growth of bacterial.To detect the concentration of cytokine in supernatant of culture solution and the blood serum of patient after infection to analysis the reactivity of the parasitifer. The purpose of these study is to optimize the methods in infection of THP-1 cells by burkholderia pseudomallei. Results establish the growth curve of B.pseudomalleiand and B.thailandensis,BT growth quicker than BP but not obvious